T-bet对鼻变态反应炎症中RORγt介导的Th17细胞反应负性调控作用和机制研究

Th1/Th17 cell mutually inhibition has been considered recently. T-bet is a main transcription factor to control differentiation of Th1 cells and RORγt is a key transcription factor to effect the differentiation of Th17 cells. We study the negative regulatory effect and its mechanisms of T-bet on RORγt-mediated Th17 cell responses in allergic rhinitis (AR) by the use of nasal-associated lymphoid tissue (NALT), which responses for nasal immune system response, from AR model mice with knock-out T-bet -/-, RORγt -/- , RORγt-GFP (green fluorescent protein) and wild type(WT). By the methods such as T cell polarization, RT-PCR, flow cytometry, Transwell experiments, cell adoptive transfer and so on, we investigate Th17 cell response and the inhibition of differentiation of Th17 caused by T-bet expression, including allergen-induced changes of nasal inflammation in above AR models. It will be detected of the kinetics effects of Th17 response by adoptive transfer of T-bet -/- T cells. To understand local mucosa immune response characterized by Th17 cells under the various T-bet-mediated pathways. It may be provided that inhibition of RORγt could become the starting point of the target treatment of AR.

最近认为Th1/Th17细胞也存在相互抑制的作用，分化调节Th1细胞的主要转录因子是T-bet；而RORγt是Th17细胞分化的关键转录因子。拟采用T-bet-/-、RORγt-/- 基因敲除（KO）、RORγt-GFP（绿色荧光蛋白）和野生型（WT）的变应性鼻炎（AR）小鼠模型，针对反映鼻粘膜免疫系统的鼻相关淋巴组织（NALT），研究AR中T-bet对RORγt介导的Th17细胞反应负调控作用和机制。运用T细胞极化、RT-PCR、流式细胞术、Transwell实验、细胞过继性转移等方法，研究上述AR模型中Th17细胞反应、T-bet表达对Th17分化的抑制作用、变应原诱导的鼻粘膜炎症变化,以及过继转移的缺乏T-bet 的T细胞对Th17细胞反应动力学的影响。了解T-bet的各种介导途径对Th17细胞粘膜局部免疫反应的影响特点。为探究抑制RORγt是否可成为AR靶向治疗的切入点提供资料。

Th1/Th2细胞失衡认为是变应性鼻炎（AR）的重要发病机制，也是主流观点，但这一理论还不足以解释AR的复杂性，比如临床上患者激素抵抗和局部变应性鼻炎的问题。近来研究发现Th17细胞在黏膜免疫中促进了炎症的进展，也是造成激素抵抗的重要原因。同时文献报道Th1细胞的转录因子T-bet能够抑制Th17细胞转录因子RORγt的表达，但RORγt以及T-bet是否介入AR的发病机制还并不清楚。本研究通过构建小鼠AR模型，发现AR模型中Th1和T-bet降低，以及Th17和RORγt增加，在模型中观察到了T-bet能够负性调控RORγt的表型。在WT、T-bet-/-、RORγt-/-、RORγt-GFP小鼠的 AR 模型，Th17细胞反应动力学变化特点如下：T-bet-/- AR 小鼠的 NALT 中存在 Th1/Th17 平衡的转变， Th17 细胞的优先募集和产生IFN-γ的CD4+T 细胞比率和绝对数的显著降低。此外，从T-bet-/-小鼠 NALT中分离的CD4+T 细胞分泌的 IL-17A水平显著高于野生型小鼠。详细了解T-bet 对 RORγt 介导的鼻变态反应局部粘膜免疫抑制机制。在 Th17 极化条件下，T-bet 的异位表达可阻止 Th前体细胞分化成 Th17 细胞，通过阻断 Th17细胞谱系特异性转录因子 RORγt 和 RORγt-靶基因的表达。同时通过RORγt敲除小鼠AR模型，以及RORc阻滞剂(SR1001)干预的小鼠模型，维甲酸孤儿受体抑制剂 SR1001 能有效缓解变应性鼻炎小鼠鼻部喷嚏和抓鼻症状。维甲酸孤儿受体抑制剂 SR1001 能有效抑制 Th17 免疫反应并增强 T-bet 调控的 Th1 免疫反应，并逆转变应性鼻炎中 Th2 免疫反应。证实了抑制RORγt能够降低Th17细胞从而减缓小鼠AR炎症的进展。在课题的开展过程中，本课题组在小鼠AR模型的构建上做了改进，模型具有更明显的鼻部症状和更轻的肺部症状，同时构建了局部变应性鼻炎小鼠的模型。本研究认为通过抑制RORγt或促进其负性调控的T-bet转录因子，有望成为AR的潜在治疗靶点。