具有orf138和orf222结构的大白菜CMS96胞质不育基因研究

鉴于大白菜CMS96胞质不育系具有orf138和orf222基因的特性，本项目以orf138和orf222正、反向引物组合PCR扩增大白菜CMS96不育系和保持系线粒体DNA（mtDNA），测定不育系中差异片段的序列；应用RFLP技术，以Hind Ⅲ、EcoRⅠ等内切酶消化大白菜CMS96不育系的mtDNA，再与orf138、orf222等探针杂交，获得多态性的RFLP带型，测定多态性片段的序列，Blast同源性比较；构建大白菜CMS96不育系、保持系mtDNA的Hind Ⅲ酶切文库，以PCR扩增大白菜CMS96不育系的差异片段或基因为探针，筛选含有CMS96不育基因插入的克隆，并测序，分析序列，获得大白菜CMS96的不育基因；构建具有编码输导肽ATPβ序列的大白菜CMS96不育基因载体，通过真空渗入原位转化方法导入到可育的菜心中，观察转基因后代的育性，验证大白菜CMS96不育基因的功能。