miRNAs调控移植静脉新生内膜增生的力学生物学机制研究

随着冠状动脉粥样硬化发病率的不断增加，用于治疗的移植静脉新生内膜增生已经成为急待解决的医学问题。移植静脉平滑肌细胞增殖、迁移是导致新生内膜增生的主要原因。miRNAs作为基因表达重要调节因子调控细胞的增殖、迁移，然而miRNAs在移植静脉新生内膜增生中的作用及其机制尚未见报道。本项目通过建立静脉移植动物模型，利用基因芯片技术筛选与新生内膜增生密切相关的差异表达miRNAs分子；用定量Real Time PCR和Northern Blot等技术进行验证；改变差异表达miRNAs的表达检测其在张应变诱导的VSMCs增殖、迁移中的作用，进而初步探讨其可能的机制；采用转染技术，在移植静脉中过表达或抑制差异表达的miRNAs的表达，验证差异表达的miRNAs在移植静脉新生内膜增生中的作用及其力学生物学机制，为深入了解移植静脉新生内膜增生发生发展机制及miRNAs在内膜增生的防治作用提供理论和应用基础

自体大隐静脉冠状动脉搭桥术常用于治疗冠状动脉阻塞病变，但血管平滑肌细胞的增殖迁移及随后的内膜增生导致移植失败。本研究探讨microRNA调控静脉平滑肌细胞增殖与迁移的作用与机制，为深入了解静脉移植中新生内膜增生的发生发展机制及防治措施提供理论和应用基础。主要发现有：张应变刺激抑制静脉平滑肌细胞miR-33的表达，miRr-33在移植静脉为低表达，而Bmp3, p-smad2以及p-smad5蛋白高表达。张应变刺激静脉平滑肌细胞的增殖。过表达miR-33抑制静脉平滑肌细胞的增殖，同时也抑制Bmp3, p-smad2以及p-smad5蛋白表达。在体研究提示高表达miR-33也抑制了移植静脉的内膜新生。miR-26a在血清和PDGF-ＢＢ刺激的静脉平滑肌细胞与移植静脉中低表达，而mapk6高表达。高表达miR-26a抑制静脉平滑肌细胞的增殖与迁移，也降低了MAPK6的表达。在体高表达miR-26a与抑制mapk6能够抑制移植静脉的新生内膜增厚。血清刺激抑制静脉平滑肌细胞miR-136的表达，miR-136在移植静脉呈现低表达。高表达miR-136抑制静脉平滑肌细胞的增殖与迁移，同时也抑制了静脉平滑肌细胞Steap3的表达。miR-23b在移植静脉和血清处理的静脉平滑肌细胞中低表达，而RBX-1为高表达。静脉平滑肌细胞转染miR-23b模拟物抑制了细胞的增殖与迁移，也抑制了RBX-1的表达。miR-133b在移植静脉和血清刺激的血管平滑肌细胞中低表达，而MSN与EZR高表达。过表达miR-133b抑制静脉平滑肌细胞增殖与迁移，也抑制了MSN与EZR的表达。miR-142-5p在移植静脉和血清刺激静脉平滑肌细胞高表达，而G0S2为低表达。抑制miR-142-5p表达抑制静脉平滑肌细胞的增殖与迁移，也刺激了G0S2的表达。低血流诱导小鼠颈总动脉miR-21高表达，血管平滑肌细胞特异miR-21敲除小鼠防止了低血流诱导的新生内膜新生。低表达miR-21也抑制了血管平滑肌细胞的增殖与迁移。内皮细胞特异敲除miR-21诱导了小鼠胸主动脉血管重建，与细胞外基质和Smad等信号分子表达改变有关。尼古丁使血管平滑肌细胞内的miR-200b表达增加，miR-200b介导的下调RhoGDIA改变尼古丁诱导的血管平滑肌细胞的增殖与迁移。这些结果说明microRNA通过调控不同的靶基因调节静脉平滑