设计了GFRⅢ区引物,PCR法《hEGF-RcDNA质粒扩增出560Kb片段,克隆于PUC19,测序证实该片段与hEGF-RⅢ序列相同。酶切切出hEGF-RⅢ定向克隆于表面呈现载体质粒pIβ2,重组构建PIERⅢ,将其转化于大肠杆菌JM109,获得hEGF-RⅢ表达菌棵,其表达蛋白量占细菌总基10(2)%。放射性受体分析证实(125)I-EGF可与表达菌特异性结合,其结合量随反应时间、温度而变化。Scatcard分析显示表达菌为单一亲和性EGF-R受体,解离常数为3.0×10(-11)mol/l每个细菌约有738个结合位点,免疫电镜显示EGF-RⅢ分布于菌膜上。利用配体竞争结合受体原理,初步建立了生物活性EGF放射分析检测方法,初步结果显示可较准确检测Ing以上生物活性EGF点生长因子。该新方法的稳定性正在研究改进中。
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数据更新时间:2023-05-31
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