猪piRNA及其介导的配子细胞转座元件沉默机制的研究

piRNA是一类在生殖细胞特异性表达的新型非编码小RNA，与生殖细胞特异性蛋白PIWI结合，参与配子形成。但目前猪piRNA还鲜有研究。本项目拟采用Solexa高速基因分析等批量分离猪睾丸组织表达piRNA，注释和预测其生物学功能，并搜寻piRNA起源转座元和靶转座元；通过序列分析排除法和配子细胞特异性表达特征鉴定piRNA；分离克隆猪piRNA相关蛋白PIWI和TDRD等基因，筛查重要SNPs，并与大白猪等群体精子性状进行关联分析；利用酵母双杂交技术筛选与PIWI相关蛋白；RNA干扰或超表达技术等分别将猪PIWI、某特定piRNA基因敲减或超表达，分析PIWI-piRNA-靶转座元件表达关系，并构建完整的piRNA作用路径。项目开展将会增加猪基因组信息，有助于认识piRNA-PIWI在猪精子生成中诱导基因沉默的分子机制。

本项目拟采用Solexa高速基因分析等批量分离猪睾丸和卵巢组织表达piRNA，注释和预测其生物学功能，并搜寻piRNA起源转座元和靶转座元；通过序列分析排除法和配子细胞特异性表达特征鉴定piRNA；分离克隆猪piRNA相关蛋白PIWI等基因，筛查重要SNPs，并与大白猪等群体精子性状进行关联分析，获得精子性状有关的分子标记；小RNA抑制或超表达技术等，发现t0001667和t1050157的靶基因分别是H2AX和LINE1，分析PIWI-piRNA-靶转座元件表达关系，并构建完整的piRNA作用路径。在SCI期刊上发表研究论文4篇；申请国家发明专利2项，获得授权专利1项；培养研究生3 名。本研究为公猪繁殖性能分子改良提供科学依据，并为猪基因组学研究积累新资料。