PPARs辅助因子在脓毒症肺损伤炎症失控中的作用及机制研究

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是临床常见危重症，死亡率高。过氧化物酶增殖体激活受体（PPARs）除参与糖、脂肪代谢外，还具有免疫和炎症调节作用。我们前期的研究表明在急性肺损伤（ALI）PPARs通过负调控NF-κB而具有抗炎作用，但针对PPARs的调控机制尚不清楚。为此，本研究在拟脓毒症肺损伤模型和体外培养的巨噬细胞，通过使用与PPARs形成异二聚体的RXR的激动剂/拮抗剂，或构建高表达/小干扰RNA，升高或降低RXR、PPARs的辅助抑制子NCoR、辅助激活子PGC-1表达，观察它们对PPARs及其靶分子NF-κB的调控作用，以明确PPARs的主要辅助因子RXR、NCoR、PGC-1表达改变对PPARs调控靶基因转录活性的影响，确定PPARs辅助因子通过调控PPARs引起ALI炎症介质大量释放参与发病。本研究将进一步阐明ALI/ARDS炎症失控机制，并为治疗提供新的靶点。

ALI/ARDS是临床常见危重症，死亡率高，其本质为炎症失控。研究发现PPARγ具有抗炎作用，而PPARγ的功能又受辅助抑制子RIP 140、辅助激活子PGC-1α的调节。RIP140、PGC-1α是否通过调控PPARγ而参与ALI/ARDS的发病尚不清楚，为此，本课题从体内、体外实验进行了研究。.RIP140在盲肠结扎穿孔诱发的脓毒症大鼠肺组织炎症细胞表达增加。正常大鼠肺泡巨噬细胞RIP140低表达，肺损伤6h后RIP140表达升高。肺损伤后RIP140主要表达于细胞核。LPS刺激Raw264.7巨噬细胞6h后RIP140的表达升高，而PPARγ表达从6小时开始下降。在转染shRNA RIP140腺病毒的巨噬细胞，下调RIP140表达可逆转LPS刺激后PPARγ下降，抑制促炎因子的表达，而这一作用可被PPARγ拮抗剂GW9662逆转。在LPS诱导的小鼠ALI模型，致伤后6h肺组织中RIP140的表达升高，而PPARγ的表达从6h降低。使用shRNA RIP140腺病毒转染小鼠发现，给予LPS后，转染组小鼠肺组织中PPARγ的表达明显升高，IL-1β、TNF- α、IL-6表达下降，而使用PPARγ阻断剂GW9662后这些促炎因子的表达又升高。病理显示转染小鼠肺组织损伤减轻。结果表明，在ALI，肺泡巨噬细胞表达RIP140升高，对PPARγ的表达及抗炎活性产生抑制作用，下调RIP140可升高PPARγ的表达进而抑制肺组织的炎症反应，从而减轻肺组织损伤产生保护作用。.在脓毒症肺损伤大鼠肺组织，PGC-1α表达明显下调。在体外Raw264.7巨噬细胞给予LPS刺激后PGC-1α表达下调。在PGC-1α高表达腺病毒转染巨噬细胞，给予LPS刺激后，PPARγ表达增高，IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低，给予PPARγ拮抗剂GW9662后IL-1β、IL-6、TNF-α表达又升高。高表达PGC-1α腺病毒转染小鼠后，给予LPS刺激，肺组织PGC-1α、PPARγ表达增高，肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α降低，而加入PPARγ拮抗剂GW9662后IL-1β、IL-6、TNF-α表达又升高，病理显示转染小鼠肺组织损伤较轻。结果表明，ALI时，肺组织PGC-1α表达降低，PGC-1α可通过升高PPARγ产生抗炎作用；因此，升高PGC-1α可抑制炎症反应、保护肺组织