基于IKK/IkB/NF-kB信号通路的针刺对急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

The mechanism of acupuncture therapeutic and compatibility of acupoints are the key problems of acupuncture discipline research which need to be solved urgently.The previous researches indicated that the acupuncture has explicit effects of protecting myocardial ischemia and reperfusion injury (MI/RI), but the action pathways and mechanisms are not clear.In recent years, the researches shown that NF-κB pathway signal plays an important role in MI/RI. And the researches report that related the influence and mechanism of NF-κB pathway in MI/RI process with acupuncture has not been seen,which is worth further studied and explored. This study take MI/RI inflammation as main line,IKK/IκB/NF-κB pathway signal as the breakthrough point, and acupuncture different combined selection of source points and connecting points as intervention means,observes the expression of NF-κB p65 and mRNA, upstream kinase IKKβ、IκBɑ and the contents of IL-1β,IL-10,TNF-ɑ,ICAM-1,COX-2 which are downstream damage factors of ischemic myocardium tissue after acupuncture. And to discuss the relationship between the protective effects of acupuncture different compatibility of acupoints resistance to MI/RI and IKK/IκB/NF-κB pathway changes,which in order to reveal the anti-inflammatory effect and action pathway of MI/RI with acupuncture from the level of molecular biology, and elucidate the protection mechanism of IKK/IκB/NF-κB signal pathway in MI/RI with acupuncture.

针刺疗效及穴位配伍的作用机制是当今针灸学科研究亟待解决的关键问题。我们前期的研究表明针刺具有明确的抗心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）效应，但其作用机制尚不明确。近年研究表明NF-κB通路在MI/RI中具有重要作用，有关针刺对MI/RI过程中NF-κB通路的影响及机制值得深入研究和探讨。本项目在前期研究的基础上观察针刺不同原络配穴对MI/RI的保护作用，以及针刺对缺血心肌NF-κB p65及mRNA、上游激酶IKKβ、IκBɑ的表达与下游致损伤因子IL-1β、IL-10、TNF-ɑ、ICAM-1、COX-2的影响，探讨针刺不同表里经、本经原络配穴抗MI/RI保护效应与IKK/IκB/NF-κB通路变化之间的关系，并应用该通路不同位点阻断剂，初步明确针刺对该通路的作用靶点，旨在阐明IKK/IκB/NF-κB通路在针刺抗MI/RI效应中的保护机制，进一步揭示针刺对MI/RI的保护效应及作用途径。

针灸对缺血心肌具有保护作用已得到证实，大量的实验研究以及我们前期的研究工作均表明针灸预处理具有明确的抗心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）的效应。国内外大量临床研究也已经证实，针灸治疗缺血性心脏病疗效肯定。穴位的配伍应用是针灸临床治疗的重要环节，亦是针灸取效的关键所在。近年来研究表明NF-κB信号通路在MI/RI中发挥着重要作用，IKK/IκB/NF-κB 通路可能参与了针刺抗MI/RI 的效应，值得深入研究和探讨。本研究以MI/RI中炎症反应过程为研究主线，以NF-κB 信号通路为切入点，观察针刺前后缺血心肌组织NF-κB 及其上游激酶IKKβ、IκBɑ表达，下游炎症因子的变化，探讨针刺抗MI/RI效应与IKK/IκB/NF-κB信号通路之间的关系，旨在进一步揭示针刺对MI/RI的抗炎效应及可能作用机制。研究结果显示MI/RI大鼠的心肌缺血面积和梗死面积明显升高，血清IL-1β含量明显升高，IL-10含量显著降低，心肌AQP1蛋白表达及PKC的活性显著升高，心肌NF-κB 、IKKβ蛋白及mRNA表达明显升高，IκBɑ蛋白及mRNA表达显著下降，与假手术组比较差异有统计学意义（P<0.05）；针刺可减少MI/RI大鼠的心肌缺血面积、梗死面积，降低血清IL-1β含量，升高IL-10含量，抑制PKC活化和AQP1蛋白表达，抑制NF-κB、IKKβ蛋白及mRNA表达；同时针刺神门+通里组、针刺内关+大陵组、针刺神门+支正组大鼠的心肌NF-κB、IKKβ蛋白及mRNA表达较模型对照组比较均显著减少（P<0.05），IκBɑ蛋白及mRNA表达较模型对照组均显著增加（P<0.05）；提示针刺抗心肌缺血再灌注后炎症损伤作用可能是通过抑制NF-κB 信号通路上游激酶的活化，从而阻止NF-κB核移位，下调其转录调控的炎性因子表达，同时促进抑炎因子释放而实现的。该研究初步探明了针刺对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用，初步探讨了针刺不同经穴、配穴抗心肌缺血再灌注损伤效应的相对特异性，为指导临床选穴配穴提供了参考；初步明确了针刺对心肌缺血再灌注损伤的保护效应与IKK/IκB/NF-κB信号通路的相关性，为揭示阐明针刺防治心肌缺血再灌注损伤的效应机制奠定了基础，同时为针刺防治心肌缺血再灌注损伤的临床治疗提供了实验依据。