无瘢痕创伤愈合中生长因子，细胞，细胞外基质的相互作用

为减少皮肤创伤愈合中的瘢痕形成，首先需要很好的理解无瘢痕的组织修复过程，口腔黏膜为我们提供了这样的研究主体。创伤修复是生长因子，细胞，细胞外基质相互作用的结果，如果能够找出口腔黏膜同皮肤相比，在创伤愈合中的不同调控过程，就能够为减少皮肤的瘢痕形成提供重要信息。本课题拟在体外培养的人工皮肤和口腔黏膜上制备创伤模型，利用创伤愈合中起主要作用的生长因子作用于二者，比较修复过程中细胞及细胞外基质的不同反应，并查证修复过程中涉及的不同信号传导途径，目前未见相关报道。本课题同时利用动物实验，创新的将皮肤和口腔黏膜交叉移植，比较自然状态及改变生存环境下的创伤修复过程。最后再利用腺病毒载体为上述动物创伤愈合添加外源性生长因子，进一步查证生长因子，细胞和细胞外基质的相互作用。本课题首次利用体内、体外实验求证无瘢痕的口腔黏膜创伤愈合特异之处，旨在为皮肤创伤愈合的改善提供理论和治疗依据。

人类口腔黏膜创伤后愈合快，形成瘢痕组织少，为我们提供了成体组织无瘢痕创伤修复的研究主体。创伤修复是生长因子，细胞，细胞外基质相互作用的结果。在创伤中起主要作用的细胞是成纤维细胞，角质形成细胞，血管内皮细胞等。这些细胞在成纤维细胞生长因子（Fibroblast Growth Factor，FGF），血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF），血小板源性生长因子（Platelet-derived Growth Factor，PDGF），转化生长因子（Transforming Growth Factor，TGF）等的调节下，可以分泌细胞外基质，参与创伤修复过程。为了更好的理解无瘢痕组织修复的特点，从而为促进皮肤的创伤愈合，减少瘢痕的形成提供新的思路和方法，本课题组按照预定计划开展了如下研究：①动物实验：将皮肤和口腔黏膜交叉移植后，制备切伤，利用免疫组织化学染色法和Real-Time PCR分别检测创伤修复过程中，相关细胞因子及细胞外基质的表达水平。②分离培养人皮肤及牙龈的成纤维细胞，利用Transwell，划痕实验，CCK-8，Real-time PCR等技术，从细胞迁移、增殖以及相关细胞因子的表达水平等方面，比较自然状态下，两者的不同。③分离培养人皮肤及牙龈角质形成细胞及成纤维细胞，并在体外培养复合式人工皮肤和口腔黏膜。④在体外培养的人工皮肤和口腔黏膜上制备创伤模型，利用不同浓度的炎症因子刺激皮肤和黏膜的角质形成细胞和成纤维细胞后，利用ELISA及Real-time PCR分别检测与创伤修复相关的细胞受体及信号通路的表达情况。结果发现：在创伤修复过程中，相较于皮肤，①口腔黏膜中利于胶原降解（如TGF-β3），促进血管形成（如VEGF，PDGF），利于上皮再生（如EGF）的细胞因子的总体表达水平较高，且较持久；②口腔黏膜成纤维细胞对TGF-β1，TGF-β3，VEGF等因子在增殖，迁移等方面的敏感性更强，即在较低浓度的刺激下，即表现显著促进作用；③口腔黏膜表皮及真皮细胞对炎症因子敏感度较低，抗炎能力较强。本课题按照原计划顺利进行，如期完成研究工作的各个计划，达到预期效果。并已发表SCI论文2篇，中文核心期刊论文4篇，2篇SCI已投稿，培养硕士研究生2名。