孕激素通过TIP30调节Olig1蛋白入核易位的机制研究

颅脑损伤的致残率可高达100%。少突胶质前体细胞（OPCs）分化障碍导致的髓鞘再生失败是造成CNS功能障碍的主要原因。孕激素促进OPCs分化、增强髓鞘再生，对CNS损伤的疗效优于其他所有治疗方法。核定位的Olig1是OPCs分化的主要启动因子之一，而TIP30则是OPCs分化停止的重要因素。从文献推导，TIP30通过三维结构变化，抑制Olig1主动转运入核。课题组前期研究中首次发现孕激素增加了Olig1入核转运，从而促进OPCs分化；且孕激素可以影响OPCs中TIP30蛋白水平。本课题在此基础上，提出孕激素通过抑制TIP30的表达或改变它的结构，间接增加Olig1入核易位，从而促进OPCs分化的观点，探讨TIP30阻止Olig1入核转运的方式，孕激素对TIP30表达和三维结构的影响，进一步阐明孕激素修复CNS损伤的机理。该研究结果为孕激素治疗CNS损伤的推广应用提供新的理论与实践基础。

颅脑损伤的致残率可高达100%。少突胶质前体细胞（OPCs）分化障碍导致的髓鞘再生失败是造成CNS功能障碍的主要原因。孕激素促进OPCs分化、增强髓鞘再生，对CNS损伤的疗效优于其他所有治疗方法。核定位的Olig1是OPCs分化的主要启动因子之一，而TIP30则是OPCs分化停止的重要因素。从文献推导，TIP30通过三维结构变化，抑制Olig1主动转运入核。课题组前期研究中首次发现孕激素增加了Olig1入核转运，从而促进OPCs分化；且孕激素可以影响OPCs中TIP30蛋白水平。本课题在此基础上，提出孕激素通过抑制TIP30的表达或改变它的结构，间接增加Olig1入核易位，从而促进OPCs分化的观点，探讨TIP30阻止Olig1入核转运的方式，孕激素对TIP30表达和三维结构的影响，进一步阐明孕激素修复CNS损伤的机理。该研究结果为孕激素治疗CNS损伤的推广应用提供新的理论与实践基础。 细胞培养成功培养了原代的少突胶质前体细胞、神经干细胞和少突胶质细胞系。原代培养的少突胶质前体细胞（oligodendrocyte precursor cells,OPCs OPC）在基因过表达和RNAi试验中耐受程度差，容易死亡，导致实验结果的不稳定。完成了Olig1和TIP30的质粒构建工作并测序。RNAi筛靶针对Olig1和TIP30的特异性序列设计了8对相关干扰序列，并完成靶标筛选。利用新型EGFP载体系统完成了RNA干扰筛选。免疫荧光化学检测检测了TIP30和Olig1在相关细胞内的表达情况。培养细胞的Western Bolt和RT-PCR.针对培养细胞设计不同实验组，利用过表达和RNAi的手段，观察在孕激素刺激后细胞内的相关分子水平的变化。实验的理论基础是Olig1蛋白位于细胞核，OPCs分化成少突胶质细胞，同时OPCs中TIP30的表达量极低。依据上述则正常的OPC中TIP30的表达不足以影像OPC分化，那么过表达TIP30则可能导致OPC的凋亡加速，由此对后续实验观察带来不利的影响。动物在体实验的进行不顺利，原因是颅脑损伤模型在温度较低的情况下，动物存活率降低，不易进行后续试验。