炎症因子在糖尿病性干眼病发病中的作用及机制研究

Diabetic patients are susceptible persons of the dry eye and only stay in symptomatic treatment, but the exact pathogenesis is not yet clear。Our previous research have found that TGF-β and NF-kB play an important part in the inflammation and apoptosis of conjunctival epithelium of diabetes patients and observed expression of CCR4+CD4+，CCR5+CD4+, and CCR6+CD4+ cells increasing in the tear film and ocular surface in diabetic patients。This subject intends to establish the NOD.B10.H2b mice model of evaporative dry eye, which are evaluated for inflammation- and apoptosis-related cytokines mRNA and protein expression by molecular biology, flow cytometry and the laser scanning confocal microscope。Correlation and causality between apoptosis and immune-based ocular surface inflammation by NOD mice will be studied to clarify mechanisms and signaling pathways of diabetes induced dry eye, subjecting to provide new drug targets and strategies for the treatment。

糖尿病患者作为干眼病的易患人群，仅停留在对症治疗水平上，其确切机制尚未阐明。糖尿病患者的结膜上皮细胞TGF-β和NF-kB在炎症及凋亡过程中起重要作用，我们前期研究发现糖尿病患者的泪液中CCR4+CD4+, CCR5+CD4+，CCR6+CD4的表达较正常对照组明显增多。本课题拟建立NOD.B10.H2b小鼠的蒸发过强型干眼模型，采用多层次(整体、动物模型、细胞、分子)和多方法(分子生物学、流式细胞学、激光共聚焦显微镜等)相结合的方法，检测NOD小鼠的结膜上皮细胞中相关炎症因子和凋亡因子的mRNA及蛋白表达，探讨糖尿病诱发干眼病的发病机理及其信号传导途径,为有效防治糖尿病干眼病提供新思路和新靶点。

糖尿病患者作为干眼症的易患人群，临床上很常见，而有关糖尿病引起干眼的研究国内外均未见报道。本课题拟采用多层次(整体、动物模型、细胞、分子)和多方法(分子生物学、流式细胞仪、共聚焦显微镜等)相结合的方法，深入研究糖尿病引起干眼的发病机制和信号传导途径，该研究为拓展防治糖尿病引起的干眼病的防治提供一种新思路、药物新靶点。具有重要的理论意义和应用价值。研究表明：(1)糖尿病组和正常对照组的OSDI问卷调查、BUT、Sit及FLS检查结果比较，两组之间均有差异。(2)糖尿病组的TGF-β1与NF-κB表达较正常对照组明显增强,TGF-β1表达与NF-κB表达呈显著正相关。糖尿病患者的泪液中IL-lb、TNF-α及VEGF的表达水平明显高于正常对照组，糖尿病患者的结膜上皮CCR4+CD4+,CCR5+CD4+以及CCR6+CD4+T细胞水平明显高于正常对照组。(3)NOD小鼠蒸发过强型干眼组在第1天7，10天，2，4，6周泪液分泌量明显少于正常对照组，蒸发过强型干眼模型角膜上皮层变薄，部分上皮细胞变性,部分基底细胞水肿。(4)实验组在第1d后TNF-α、IL-17表达明显增强,第1d Caspase 3表达明显增强，第14d开始明显减弱。(5)NOD小鼠结膜上皮中CCR5+CD4+T细胞水平明显高于正常对照组。结膜组织IL-1b蛋白水平的表达在实验组第1d，7，10及14天表达较正常组比较有差异。(6)IL-17，TNF-α蛋白水平的表达在实验组第1d，7，10及14天表达较正常组均有差异。炎性因子TNF-a、IL-lb、IL-17和趋化因子等在糖尿病引起干眼的发生发展过程中起重要作用，NF-κB通路和MAPK信号传导通路可能与其发病机制具有密切联系。