抗赤霉病蛋白酶抑制剂cＤＮＡ的克隆和鉴定

在测定小麦巯基蛋白酶抑制剂(CPI)和丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)氨基酸序列后,建立了两种抑制剂的cDNA文库，设计出PCR所需的5’端和3’端引物（3’端有三个氨基酸采用混合密码子），装上酶切位点后，其合成引物学[一这单一带，经体外扩增处理，筛选出含PCR扩增片段的重组子，进而获得两种蛋白酶抑制剂的基困序列。随层经标记、原位杂交、southern杂交鉴定，阳性片段克隆至M13载体获得序列分析结果。其重组表达质粒转化入E、celiDH5a中，使之表达出SPI和CPI，表达产物经分离纯化，SPI和CPI分子重分别为1940或12246，此与天然SPI和CPI的分子量基本相符，经用表达产物对小麦赤霉病菌生长的抑制试验表明，当SPI和CPI的浓度分别为72μg或144μg时，对病菌就有抑制作用。