委陵菜积雪草酸对非酒精性脂肪肝内质网应激与肝细胞脂代谢的作用和机制的研究

Endoplasmic reticulum stress (ERS) plays an important role in the pathogenesis of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD),which has been considered as a critical therapeutic target for the treatment of NAFLD. In our previous studies,we have found that Asiatic Acid from Potentilla chinensis (AAPC) significantly reduced the fatty infiltration and deposition; and the latest experiment revealed that AAPC could ameliorate the disorders of lipid metabolism, and inhibit the expression of ERS-related proteins.These preliminary results indicated that the protective effect of AAPC on NAFLD might be related to the regulation of ERS, but the exact mechanism remained unclear. In this study, the model of cell steatosis in L02 cells will be induced by oleic acid for investigating the effect of AAPC on the lipid metabolism. Moreover, L02 cell will be cultured with thapsigargin to induce ERS, and the regulative effect of AAPC on ERS will be studied. In addition, to establish the animal model of NAFLD, the SD rats will be fed with high-fat diet, then the effects of AAPC on the ERS and lipid metabolism will also be investigated in vivo.In summary,this study will investigate the protective mechanism of AAPC on NAFLD by detecting the ERS and lipid metabolism in vitro and in vivo;thus it will provide the theoretical basis for the clinical treatment of NAFLD.

内质网应激在非酒精性脂肪肝的发生发展中扮演着重要的角色，基于内质网应激的调节来研究非酒精性脂肪肝发病机制及靶向药物治疗已成为目前研究的一个热点。我们前期对委陵菜积雪草酸（AAPC）进行护肝实验中发现AAPC可减轻脂肪浸润和沉积；近期的预试验发现AAPC能够改善肝细胞脂代谢紊乱、抑制内质网应激相关蛋白的表达；提示，其抗脂肪肝的作用可能与调节内质网应激有关，但确切机制有待进一步深入研究。本项目拟采用油酸诱导 L02细胞建立细胞脂肪变性模型，研究AAPC对肝细胞脂代谢的影响；用毒胡萝卜素诱导建立内质网应激细胞模型，检测AAPC对内质网应激的调节作用；以及用高脂饲料饲养SD大鼠诱导非酒精性脂肪肝动物模型，研究AAPC在体内对内质网应激相关蛋白表达及脂代谢的影响。本研究将基于内质网应激及脂代谢调节为靶向，阐明AAPC抗非酒精性脂肪肝的作用机制，为其治疗非酒精性脂肪肝提供实验依据和理论支持。

非酒精性脂肪肝（NAFLD）的早期表现是肝脂肪变性，其特点是甘油三酯在肝细胞内过度积累，脂肪肝的存在会导致疾病向肝硬化发展。内质网应激、炎症细胞因子产生为标志的“二次打击”导致肝细胞炎症和凋亡，最终导致NAFLD的发生发展，因而是目前药物治疗NAFLD比较关键的靶点。本项目将从体内外阐明委陵菜积雪草酸（AAPC）对NAFLD的保护作用及机制。首先，我们采用大鼠NAFLD模型研究AAPC对NAFLD大鼠的保护作用。研究发现，AAPC能减轻高脂饲料引起的大鼠肝脏脂肪变性和肝细胞损伤。进一步的机制研究表明，AAPC能调控脂肪生成相关蛋白的表达，减轻氧化应激及脂质过氧化，抑制内质网应激信号通路基因和蛋白的表达最终减轻大鼠肝细胞损伤。其次，我们开展了体外细胞实验，即检测AAPC对非酒精性脂肪肝细胞中脂质沉积、氧化应激以及对脂肪生成信号通路AMPK/LXRα/SREBP-1c/ACC1/FAS表达的影响，进一步探讨AAPC对非酒精性脂肪肝细胞脂质代谢的影响及作用机制。体外结果表明，AAPC能减轻氧化应激及抑制AMPK/LXRα/SREBP-1c/ACC1/FAS信号通路，降低脂质沉积，最终起到改善油酸诱导非酒精性脂肪肝细胞脂质代谢的作用。本课题基于内质网应激及脂代谢调节为靶向，阐明AAPC抗NAFLD的作用机制，为其治疗NAFLD提供实验依据和理论支持。.此外，本课题同时还探讨了AAPC预防治疗急性肝损伤(ALI)的作用和机制。急慢性肝损伤具有共同的致病机制，均可归因于肝细胞变性和细胞死亡。内质网应激（ERS）与自噬均是介导细胞死亡的方式。研究证明ERS与自噬密切相关，在急性肝损伤的发生发展起到重要作用，因而是目前药物预防治疗急性肝损伤关键的靶点。本实验将从体内外阐明AAPC对ALI的预防保护作用及机制。体内采用小鼠ALI模型研究AAPC对ALI的预防保护作用。体外细胞实验进一步探讨AAPC对正常肝细胞中ERS和自噬信号通路的影响。研究发现，AAPC能减轻脂多糖/D-氨基半乳糖引起的小鼠ALI。进一步的机制研究表明，AAPC能够减轻ERS的反应从而减轻肝细胞的损伤和凋亡；此外，还能通过促进肝细胞自噬，加速内质网恢复稳态从而促进肝细胞存活和抵御外界不良刺激。该实验从体内外阐明AAPC预防作用于ALI的作用机制，为其预防ALI提供实验依据和理论支持。