人脂肪间充质干细胞与人胚胰岛样细胞簇联合移植治疗糖尿病的实验研究

探讨人脂肪间充质干细胞（AMSC）与人胚胰岛样细胞簇（ICC）联合移植治疗1型糖尿病的可行性及安全性。首先获得人AMSC，利用细胞反应器扩增仪经短时间内扩增后，与ICC细胞悬液及条件培养液和诱导药物分别进行培养、诱导分化。测定细胞培养液的胰岛素及C-肽水平，证明其具有胰岛素分泌功能。然后，将细胞用超顺磁氧化铁复合物标记后分别植入非人灵长类动物（食蟹猴）腹腔内，于移植后1天、7天、14天、28天进行磁共振检测体内移植细胞的存活状态，并观测胰岛素、血糖及C-肽水平，随后将猴处死，通过光镜、电镜、流式细胞仪对移植细胞的生长分泌功能及致瘤情况等做出评估。通过该课题的研究，有望为解决胰岛移植的来源困难、排异及生物安全性等问题提供理论依据，为临床开展自体干细胞移植治疗1型糖尿病奠定基础。

项目摘要：.背景：Ⅰ型糖尿病胰岛移植被认为是有望彻底治愈糖尿病（Ⅰ型）并阻止其并发症进展的最有效的治疗手段。尽管胰岛移植已取得很大成效，但胰岛来源的缺乏仍是影响其临床应用的主要因素。目前，国内外学者正积极进行以下几个方面的研究：①改进胰岛的分离技术，以获得足够数量和高质量的胰岛。②研究对胰岛没有毒性的免疫抑制方案。③利用干细胞技术和异种移植来克服胰岛来源短缺的问题，随着干细胞生物学的发展，对于运用干细胞技术获得能分泌胰岛素的细胞或组织的研究受到关注。干细胞是人体内可以转化为各种器官和组织的多功能细胞，目前已有多种途径可得到分泌胰岛素的细胞：胚胎干细胞、成体干细胞及利用基因工程技术得到分泌胰岛素的细胞。.研究内容：首先分离培养人AMSC，通过流式细胞术检测CD29, CD45, CD54, CD90, CD106表面抗原，以及诱导分化实验对AMSC进行鉴定。随后利用IPC 细胞悬液及条件培养液和细胞因子分别对AMSC进行诱导。通过免疫荧光、real-time PCR等技术测定细胞PDX-1、NES、ABCG2、INS等的表达，通过检测培养液中胰岛素水平，证明其具有胰岛素分泌功能。然后，将细胞用DAPI标记后植入大鼠肾被膜，于移植后1 天、7 天、14 天、28 天检测胰岛素、血糖及C-肽水平，对移植物调节血糖的功能做出评估。.结果：从胚胎胰腺内可以分离出胰岛前体细胞。胰腺前体细胞可诱导为分泌胰岛素的胰岛样细胞。从人脂肪中分离培养出AMSC，并通过药物、IPCs、以及IPCs条件培养液成功诱导AMSC为胰岛样细胞，且诱导后的细胞具有分泌胰岛素的功能。从人胚胰腺组织中分离出的胰岛前体细胞，以及人脂肪组织中分离出的AMSC可以作为胰岛细胞移植的细胞来源。科学意义：通过该课题的研究，探讨胚胎胰腺干细胞、人脂肪间充质干细胞是否可以作为I型糖尿病的可靠移植物来源，该课题有望为解决胰岛移植来源、生物安全性等问题提供理论依据，为临床开展自体干细胞移植治疗I 型糖尿病奠定基础。