黄芪当归合剂有效组分抑制慢性肾脏病血管内皮细胞微颗粒释放的分子机制

中西医均认为内皮细胞功能紊乱（ECD）促进慢性肾脏病（CKD）进展。内皮细胞活化或凋亡时释放的微颗粒（EMP）更加重内皮损伤和血管病变，黄芪甲苷、阿魏酸抑制细胞内游离钙和细胞骨架重排，可能抑制EMP释放。二者的复方组分W6003能保护内皮细胞，延缓CKD进展。本研究应用慢性肾衰竭动物模型动态观察疾病进展过程中W6003对EMP类型、数量及血压、血生化指标、肾组织病理改变的作用，探讨W6003抑制EMP释放与其肾保护作用的相关性，利用内皮细胞和肾小管上皮细胞共培养体系加以验证。应用体外培养的内皮细胞系，观察W6003及其两组分对影响EMP释放的环节（细胞内游离钙，细胞膜转位酶活性，钙蛋白酶及caspases活性）以及可能的细胞信号途径（MAPK、ROCK）的作用，明确W6003的作用靶点和信号通路，探讨两单体组分减少EMP释放和防治CKD进展的协同作用机制，为复方中药的应用提供现代医学理论。

黄芪甲苷（AS-IV）和阿魏酸（FA）是黄芪当归合剂（A&A）中的重要活性成分。本研究利用慢性肾衰竭的大鼠模型及体外培养细胞深入研究AS-IV、FA及其组合物AF的肾保护作用机制。雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、5/6肾切除组（Nx）、5/6肾切除+AF治疗组（AF）、5/6肾切除+AS-IV 治疗组（AS-IV）、5/6肾切除+FA 治疗组（FA）。与sham组比较，Nx组的肾脏出现明显的肾小球硬化、间质纤维化和细胞浸润；AF治疗可有效改善病理损伤。在Nx组动物中，血压明显高于sham组；AF治疗后在第4周和8周时有一定的降压作用；AS-IV和FA组未出现血压的明显改善。sham组大鼠的血肌酐（Scr）水平相对稳定。与sham组相比，Nx组在第2、4、8、12周持续增高。与Nx组相比，AF组动物的Scr水平显著降低；在第4至12周，FA组也出现Scr的显著降低。与sham组相比，Nx组在第2周起Upro逐渐增高（P均<0.05）。AF组Upro显著低于Nx组，在第2和4周，AS-IV组也出现了Upro的显著降低。Nx组动物肾组织中NO的含量显著低于sham组， AF治疗后，NO的表达明显增高。Nx组动物肾组织中ADMA的含量显著高于sham组和各治疗组。Nx组肾组织中eNOS表达无明显变化，AF治疗后eNOS的含量显著增高。各组间肾组织中VEGF的含量无明显差异。与sham组比较，Nx组血液中EMP明显增多，尤其以CD144+/CD31+双阳性的EMP。而在AS-IV和AF组的CD144+/CD31+双阳性的EMP显著低于Nx组。同时，与sham组比较，Nx组血液中PMP明显增多，而各治疗组PMP均显著低于Nx组。细胞实验发现，TNF-α刺激内皮细胞释放EMP，并以CD31+/CD62E-和CD31+/CD62E+为主。AF治疗后，这两类EMP的浓度显著低于TNF-α。此外TNF-α刺激后内皮细胞APLT活性明显降低，而AF治疗后APLT活性显著低于TNF-α组。同时TNF-α组内皮细胞的Caspase 3、Caspase 9、ROCK-II表达显著增多。经治疗后，AS-IV及AF刺激后，Caspase 3、Caspase 9表达明显减少。因此AF能够降低血压、减少蛋白尿，改善肾功能。这可能与其减少细胞凋亡，增加APLT活性而减少EMP释放有关。