基于金磁颗粒及核酸扩增策略的高性能蛋白检测技术建立及其在CCN1蛋白检测中的应用研究

The biomarkers have a valuable role in the diagnosis and the treatment of the diseases. Now the protein analyzing encounter the problems:(1) Low sensitivity of analyzing systems, results in the defects of analyzing the proteins with low concentration; (2) In the most popular chemiluminescence analyzing systems, the interference of signal by the magnetic particle, and the dispersivity of magnetic particle, lead to instability of the analyzing system. These problems results in that the potential values of the protein biomarkers cannot be explored thoroughly, and the conclusion of the clinical studies cannot be applied in clinic. Mainly for the problems above, we plan to decrease the loss of the signals and improve the stability of the analyzing system by the gold magnetic particle, and increase the signals by the nucleic acid amplification strategies in an electrochemiluminescence(ECL) system, therefore the high-performance analyzing system will be constructed. Moreover, we will construct the CCN1 protein analyzing system which will be applied in the clinical study. This study will solve the key problem that analyzing the protein in the low concentration levels，which will improve the clinical application of the protein biomarkers and provide a technology strategy for the high-performance protein analyzing.

蛋白生物性标志物在疾病临床诊疗中具有极其重要的价值。目前蛋白生物标志物的检测存在以下两个问题：（1）检测系统灵敏度低，导致蛋白生物标志物低浓度水平检测缺陷；（2）目前最常用的化学发光检测系统中磁微粒分散性不良及其对发光信号的干扰，导致检测系统稳定性下降。这些导致蛋白生物标志物潜在价值不能被充分利用，其临床研究结果不能有效应用于临床。针对以上问题，我们使用金磁颗粒的方法降低反应体系中化学发光信号损耗并增加其稳定性，基于核酸扩增的策略放大检测体系中化学发光信号，从而建立高性能的蛋白检测系统，并建立CCN1蛋白检测体系并应用于临床研究。该项目的实施，将解决临床检测中蛋白标志物低浓度水平检测的关键问题，达到促进其临床价值充分应用的目的，并为临床诊疗中蛋白检测提供高性能的检测技术平台。

本研究的预期目的为建立一种高灵敏度蛋白质检测新方法，建立白血病生物标志物CCN1蛋白检测体系并应用于临床研究。本项目在研究过程中严格按照计划实施。通过三年的研究，目前已经基本完成了所有预定研究目标，成功构建了电致化学发光免疫分析方法用于CCN1的检测方法，此方法基于催化发夹自组装核酸放大策略增敏，并使用了具有良好的电子转移效能和较大表面积的纳米金颗粒。通过与商品试剂盒ELISA方法、一般免疫荧光检测方法相比，此检测方法具有具有较好的线性范围、特异性和稳定性。通过检测所收集急性髓系白血病血清中的CCN1蛋白，新建立的高性能电化学方法检测结果具有更好的临床灵敏度和临床特异性，为深入探索CCN1在急性髓系白血病中的作用及其机制奠定了基础。本研究增加了CCN1基因多态性的相关内容研究，结果表明CCN1基因多态性与AML发病的风险具有较高的关联性，尤其AML-M2和AML-M5亚型。.本课题历时三年，共发表标注有基金号的文章4篇，其中SCI论文2篇，影响因子最高8分。本课题根据所建立白血病生物标志物CCN1蛋白检测体系申请专利一项。培养硕士研究生一名。.本项目的实施，解决了临床检测中蛋白标志物低浓度水平检测的关键问题，进一步拓展了CCN1蛋白在白血病中应用价值，为白血病诊疗提供了一个十分有效的工具。.