猪源新城疫病毒V蛋白在跨种感染中的作用机制研究

Recently, cross-species infetion of the host range of Newcastle disease virus continues expanding. The swine original Newcastle disease virus JL01 had been isolated by our lab, and the regression test showed that the virus could .induce piglet death. And our former studies showed that HN protein(119 and 120 aa mutation) was related to the infection ability of swine Newcastle disease virus JL01. But until now the mechanism of Newcastle disease virus on cross-species infection is not known, the V protein of Newcastle disease virus is related to the pathogenicity and host tropism. The reverse genetics will be used to construct the infectious clone of Newcastle disease virus JL01, and then several recombinant Newcastle disease virus will be rescued such as V protein deletion strains, V protein avirulent replacement strains and virulent replacement strains. On the basis of the biological characterization of recombinant Newcastle disease virus rescued, the porcine respiratory cells (lung epithelial cells and airway epithelial cells) were infected with purified recombinant virus. The host cell protein changes were detected by differenial proteomic method, and the infection and pathogenicity of porcine respiratory tract cells change of the recombinant virus V protein deletion and replace strains will be analysised. Finally, the mechanism of V protein of swine Newcastle disease virus on cross-species infection will be disclosed.

近年来，新城疫病毒跨种感染宿主的范围不断扩大，本实验室分离到猪源新城疫病毒JL01株，通过动物回归试验证实该病毒对猪的致死性感染。并通过前期研究确定了该病毒的感染和致病性与HN蛋白跨膜区（119-120位氨基酸）相关，但新城疫病毒跨种感染的机制仍不清楚。V蛋白在新城疫病毒的致病性和宿主嗜性等方面具有重要作用，因此本项目拟采用反向遗传操作技术，以猪源新城疫病毒JL01株为模板构建感染性克隆，分别拯救出V蛋白编码基因缺失株、新城疫病毒弱毒株和强毒株V蛋白基因替换株等系列重组新城疫病毒。对拯救的重组新城疫病毒进行生物学特性鉴定的基础上，用纯化的重组病毒分别感染猪呼吸道细胞系（肺上皮细胞和呼吸道上皮细胞），利用差异蛋白组学方法研究重组病毒感染后的宿主细胞蛋白变化，分析V蛋白变异的重组新城疫病毒对猪呼吸道细胞感染性和致病性变化，确定V蛋白在猪源新城疫病毒跨种感染中的作用机制。

近年来，新城疫病毒跨种感染宿主的范围不断扩大，本实验室分离到猪源新城疫病毒JL01株，通过动物回归试验证实该病毒对猪的致死性感染，但新城疫病毒跨种感染的机制仍不清楚。V蛋白在新城疫病毒的致病性和宿主嗜性等方面具有重要作用，因此本项目拟采用反向遗传操作技术，以猪源新城疫病毒JL01株为模板构建感染性克隆，分别拯救出V蛋白编码基因缺失株、新城疫病毒弱毒株和强毒株V蛋白基因替换株等系列重组新城疫病毒。对拯救的重组新城疫病毒进行生物学特性鉴定的基础上，用纯化的重组病毒分别感染猪呼吸道细胞系（肺上皮细胞和呼吸道上皮细胞），利用差异蛋白组学方法研究重组病毒感染后的宿主细胞蛋白变化，分析V蛋白变异的重组新城疫病毒对猪呼吸道细胞感染性和致病性变化，确定V蛋白在猪源新城疫病毒跨种感染中的作用机制。本研究构建了表达猪源新城疫病毒NP、P及L基因的三种辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L，并构建了表达T7 RNA聚合酶的重组痘苗病毒，为拯救新城疫病毒提供体外包装系统。并在完成猪源新城疫病毒全基因测序及序列分析的基础上，分6段克隆新城疫病毒的全长基因，并拼接为15186bp的基因组。再将新城疫病毒强毒株河北株(HB)、中毒株BC株(BC)、低毒株Lasota株(La)的V蛋白基因分别替换原有病毒的V蛋白基因，并拯救获得了新城疫病毒V蛋白终止及V蛋白基因替换的重组新城疫病毒。目前正在进行重组毒株的生物学特性鉴定，后续将完成后续将进行V蛋白基因替换及终止的重组新城疫病毒感染差异蛋白功能研究，并确定V蛋白在猪源新城疫病毒跨种感染中的作用机制。