分泌型簇集素调控非小细胞肺癌增殖、凋亡和侵袭的机制研究

Secreted clusterin（sCLU） plays important roles in various pathophysiological processes,including tissue remodeling,reproduction,lipid transport,and apoptosis. sCLU was found as an 80-kDa glycoprotein in virtually all body fluids. Our previous studies showed that sCLU influences the molecular biology such as proliferation,apoptosis and invasion of non-small cell lung cancer(NSCLC) cells and could be a potential target for treatment, but the molecular mechanism is not clear. PI3K-AKT plays pivotal role in malignancies. Our initial results together with other previous studies showed sCLU and PI3K-AKT have close interactions. In the current project,we will conduct in vitro and in vivo studies; we will also use human non-small cell lung cancer tumor samples together with other clinical data to explore the relationship between sCLU and PI3K-AKT. The effects of factors such as IGF-1 and EGF in the pathway will be focused on. With the RNAi gene knockdown and DNA microarray,we will try to find other possible pathways that sCLU may be involved. We aim to explain the molecular mechanism of sCLU`s regulation on NSCLC. Our study may help to find novel molecular markers related to proliferation,apoptosis and invasion in NSCLC and also contribute to the research and development of drugs targeting sCLU,PI3K-AKT pathway.

分泌型簇集素(Secreted clusterin，sCLU)在组织的再生、脂质转运及凋亡等病理生理过程中起着重要作用。我们前期研究显示sCLU的表达可以影响非小细胞肺癌（NSCLC）的增殖、凋亡和侵袭,可望成为NSCLC的治疗靶点，但sCLU的作用机制尚不清楚。PI3K-AKT是恶性肿瘤发生、发展中的重要信号传导通路。预实验显示sCLU和PI3K-AKT有着密切关系，本课题将从细胞水平、动物实验并结合人肺癌标本及临床资料研究NSCLC中sCLU对PI3K-AKT信号传导通路的调控，及肿瘤细胞微环境中重要生长因子IGF-1、EGF在该调控体系中的作用。本课题还将采取基因沉默、基因芯片等方法发现sCLU作用的其他可能通路。阐明调控sCLU影响NSCLC增殖、凋亡和侵袭的机制，发现新的分子标志物，为针对sCLU、PI3K-AKT信号传导通路调控体系精确位点的靶向药物的研发提供依据。

分泌型簇集素(Secreted Clusterin，sCLU)在组织的再生、脂质转运及凋亡等病理生理过程中起着重要作用。在本研究中，我们着重探讨了sCLU对非小细胞肺癌侵袭、分化等的影响，以及诊断和预后判断价值。. 我们利用纯化的sCLU蛋白，通过Boyden Chamber 体外侵袭小室实验检测分泌型sCLU对于肺癌细胞系LETP-A-2的影响，结果发现分泌型sCLU明显促进肺癌细胞的迁移（P=0.0021）。. 为了确定sCLU在不同病理类型的肺癌组织中的表达情况，我们收集了肺腺癌患者和肺鳞癌患者的肺癌组织及肺癌周围无瘤组织标本。结果显示，多数（63%）肺腺癌的组织芯片相比肺腺癌周围无瘤组织染色增强；而多数（81%）肺鳞癌的组织芯片与肺鳞癌周围无瘤组织相比染色减低。我们在A549细胞系中检测了肺泡表面活性蛋白C（SP-C）和p63蛋白的表达及其mRNA的翻译情况。结果发现，sCLU的存在使SP-C的表达增加275%，p63的表达降低65%。. 为了研究和证实sCLU在上皮细胞-间质样细胞转换（Epithelial-Mesenchymal Transition, EMT）中的作用，我们检测了培养液中sCLU浓度对A549肺癌细胞系细胞形态学的影响。结果显示，随着培养液中sCLU浓度的增加，A549细胞的形态随之发生相应变化，当培养液中sCLU浓度达到300ug/ml时，出现了纺锤形细胞。通过Western Blot我们发现，当培养液中sCLU浓度达到300ug/ml时，上皮细胞表面标志物ZO-1的表达下降，波形蛋白的表达增高。. 为了研究sCLU肺癌诊断和预后判断中的作用，我们检测了肺癌患者SCLU的血清水平。数据显示，肺癌患者的血清水平高于正常人群( 603.7 / 288.8, p<0.0001)。此外，血清SCLU水平可作为潜在的肺癌生物标志物（its ROC area = 0.8442）。. 此外，我们还研究了SCLU对胸外科另一类重要疾病——食管鳞癌的诊断及预后价值。结果显示，食管鳞癌患者血清sCLU浓度明显高于健康对照组，p＜0.0001。并计算出当sCLU浓度设定为335.5 ug/mL时，诊断食管鳞癌的敏感性为71.26%，特异性为77.94%。