靶向c-Met诱导胃癌细胞自噬在肿瘤治疗中的作用及机制

The international consensus on treatment principal for advanced gastric cancer is comprehensive therapy based on chemotherapy. Now the research for advanced gastric cancer is focusing on to discovering new targets and screening suitable patients for individual treatment. Targeting c-Met (hepatocyte growth factor receptor) to treat advanced gastric cancer is one of the most promising methods. However, it is not clear how to choose right patients and cope with drug resistance. We have found that: c-Met inhibitors could induce autophagy of gastric cancer cells; inhibiting autophagy could increase the sensitivity of gastric cancer cell for c-Met inhibitors. Thus, we suppose that autophagy may play a key role in the treatment of advanced gastric cancer of targeting c-Met. To test this hypothesis, we intend to perform in vitro and in vivo experiments to investigate the role of autophagy in the treatment of advanced gastric cancer of targeting c-Met, further explore the molecular mechanism of autophagy in treatment of gastric cancer. Our study will elucidate the molecular mechanism of autophagy regulated by c-Met and provide theory basis and strategy for targeting c-Met to treat advanced gastric cancer and overcome drug resistance.

对于晚期胃癌，目前国际公认的治疗原则是以化疗为主的综合治疗,探索新的药物靶点并进行个体化治疗，是近年来胃癌治疗研究重点。酪氨酸激酶受体c-Met（肝细胞生长因子受体）是治疗晚期胃癌药物最具潜力的靶点之一，但如何实现个体化靶向治疗以及如何减少耐药性等问题尚未解决。申请人在前期研究中发现：c-Met抑制剂可以诱导胃癌细胞系自噬的发生；抑制自噬可以增加胃癌细胞对c-Met抑制剂的敏感性。由此提出自噬在靶向c-Met治疗胃癌中发挥重要作用的科学问题。本课题拟采用体内和体外实验，明确自噬在靶向c-Met治疗中发挥的作用以及c-Met抑制剂诱导胃癌细胞发生自噬的可能分子机制，了解c-Met信号通路与自噬的交互作用，为靶向c-Met通路治疗晚期胃癌以及克服其耐药问题提供理论基础和解决策略。

本项目旨在胃癌患者组织标本与体外细胞动物实验两个水平探索Met表达在胃癌中的意义及Met抑制剂发挥抑瘤作用的机制及可能的联合策略。重要结果如下： .1）收集了进展期胃癌患者168例，运用免疫组化及FISH方法检测了患者组织标本中MET/p-MET蛋白表达水平以及MET基因扩增情况。在168例患者中，137例患者可评估MET蛋白表达，53例患者MET蛋白表达阳性（39%）；134例患者可评估p-MET蛋白表达，8例患者p-MET蛋白表达阳性（6%）；113例患者可评估MET基因扩增情况，8例患者MET基因扩增（7%）。MET蛋白表达与患者预后无关，MET蛋白表达与MET基因扩增显著相关，所有MET基因扩增的患者均表现为MET蛋白表达，并且MET基因扩增也与p-MET表达明显相关，该结果为中国晚期胃癌患者MET表达情况提供数据证据，对临床开展靶向Met治疗筛选可能获益群体提供重要依据。.2）体外细胞动物实验中，探索了Met抑制剂引起胃癌细胞自噬产生的可能机制，并探索Met抑制剂联合自噬抑制剂的抑瘤作用及可能机制，为临床试验提供依据。体外细胞研究中，选择Met表达阳性细胞MKN45和SNU5进行后续研究，四种Met抑制剂PHA、SU、Criz（克唑替尼）、Voli（volitinib）处理细胞后，发现Met磷酸化（pMet）被明显抑制，且四种Met抑制剂均可诱导细胞自噬（自噬相关marker：p62表达下调，LC3 II/I比例增加），在此基础上，用自噬抑制剂Baf A1与HCQ处理细胞后，可以阻断Met抑制剂介导的自噬，且证实Met抑制剂诱导自噬是通过引起自噬体形成而不是阻滞自噬降解途径。.3）既然Met抑制剂可以诱导胃癌细胞发生自噬，其发挥作用机制做了深入探索，发现自噬产生时伴随mTOR和ULK1磷酸化水平显著下降，说明mTOR失活与ULK1激活参与了自噬发生，且这种现象可被Met配体HGF及mTOR激动剂MHY逆转，进一步说明Met抑制剂通过Met/mTOR/ULK1级联反应诱导自噬。.4）基于上述研究结果，我们深入探索了联合自噬抑制剂和Met抑制剂的抑瘤作用，体外细胞中发现自噬抑制剂联合Met抑制剂可明显抑制细胞的增殖，且细胞凋亡比例增加，体外动物移植瘤模型中进一步证实自噬抑制剂联合Met抑制剂具有协同抑瘤作用。