苘麻叶总黄酮抗炎活性及机制研究

Flavonoid has antioxidant, anti-inflammatory, antibacterial and immuno-enhancement function, as main ingredients of leaves of Abutilon theophrasti Medic., it is important to study the anti-inflammatory effects and mechanism for veterinary clinical application and development of anti-inflammatory traditional Chinese medicine. Through the establishment of lipopolysaccharide (LPS) induced macrophages RAW 264.7 cell model, the ABC-ELISA, Griess, RT-PCR and Western blot methods will be adopted for determination of IL-1β, IL-6, IL-10, TNF-α level, content of NO and PGE2, iNOS and COX-2 mRNA and protein expression, it will reveal inflammation influence of total flavonoids in leaves of Abutilon theophrasti Medic. by determination of the cytokines and mediators in vitro; protein expression of ERK1/2, p38, JNK in MAPK pathway and p65, IκB in NF-κB pathway will be determined by Western blot and immunochemical, the effects of total flavonoids in leaves of Abutilon theophrasti Medic.on inflammatory signaling pathways will be examined. At the same time making rats acute lung injury model caused by LPS, it is further clarified the effects of total flavonoids in leaves of Abutilon theophrasti Medic. on cytokines, inflammatory mediators and signal pathway in vivo, and it is pointed out overall the anti-inflammatory mechanism of total flavonoids in leaves of Abutilon theophrasti Medic., for providing reference for prevention and treatment of animal inflammatory diseases effectively, and a new method for the green veterinary medicine research and development.

黄酮具有抗氧化、抗炎、抗菌、增强免疫等作用，作为苘麻叶主要成分，研究其抗炎作用及机制对兽医临床抗炎中药开发与应用有重要意义。通过建立脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞系 RAW 264.7细胞模型，采用ABC-ELISA、Griess、RT-PCR和Western blot方法测定IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α水平、NO与PGE2含量、iNOS与COX-2 mRNA及蛋白表达量，揭示苘麻叶总黄酮在体外对细胞因子和炎症介质的影响；采用Western blot和免疫化学法分别测定MAPK通路ERK1/2、p38、JNK和NF-κB通路p65、IκB蛋白表达量，考察其对炎症信号通路的影响。同时通过LPS致大鼠急性肺损伤模型，进一步阐明苘麻叶总黄酮在体内对细胞因子、炎症介质和信号通路的影响，系统揭示苘麻叶总黄酮抗炎机制，为临床有效地防治动物炎症性疾病提供参考，为绿色兽药的研发提供新的思路。

炎症是机体免疫系统应对感染、损伤等有害刺激的第一防御反应。正常情况下，炎症可以激活机体免疫系统，抵抗多种刺激，但这一过程的异常则可能会导致细胞损伤或代谢紊乱，从而引发一些疾病。目前临床应用的抗炎药物主要有甾体和非甾体两大类，但两者都具有一定的副作用。因此，研究和开发新的抗炎药物引起诸多学者的关注。. 苘麻为锦葵科苘麻属一年生草本植物，含有黄酮、香豆素、酚类和有机酸等化合物，其中黄酮类化合物含量较为丰富。黄酮类化合物具有抗肝细胞毒、抗动脉粥样硬化、抗癌、抗炎、抗氧化及抗肿瘤等多种生物学活性。本项目以苘麻叶总黄酮为研究对象，采用体内外炎症模型深入探讨了其抗炎作用及机制，为临床抗炎中药的研发奠定了理论基础。. 采用ELISA法检测了TNF-α、IL-6、IL-10及IL-1β的含量；采用Griess法和ELISA法检测了NO和COX-2或PEG2的含量；采用荧光定量PCR法测定了苘麻叶总黄酮对炎症介质iNOS、COX-2和信号通路中ERK1/2、p38α、JNK、p65、IκB的mRNA表达量的影响；采用Western blot方法检测了苘麻叶总黄酮对信号通路中ERK1/2、p38α、JNK、p65和IκB蛋白磷酸化作用的影响。. 本试验通过建立LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠模型，从细胞因子、炎症介质和信号通路三个方面较为全面地研究了苘麻叶总黄酮的抗炎作用及其机制。试验结果表明，苘麻叶总黄酮显著地降低了LPS诱导的RAW264.7细胞和小鼠体内TNF-α、IL-6和IL-1β的含量，增加了IL-10的含量；并且显著地降低了NO和COX-2或PEG2的含量以及iNOS、COX-2的mRNA表达量；此外，显著地降低了ERK1/2、p38α、JNK、p65基因的表达量，增加了IκB基因的表达量；同时还能够显著抑制ERK1/2、p38α、JNK、p65蛋白的磷酸化作用及IκB的降解，并且显著降低了p-IκB的表达量。综上所述，苘麻叶总黄酮能够直接抑制炎症介质的释放，也能够通过NF-κB和MAPKs两条信号通路抑制炎症因子的表达。本项研究为苘麻叶总黄酮开发为新型抗炎中药提供了理论依据。