基于亚细胞比较蛋白组学研究清热解毒中药黄芩、黄连抑制乳腺癌转移的机理

In traditional Chinese medicine, "inside generating cancer poison" is the key origin of breast cancer, "retaining phlegm poison" is the main pathogenesis,"surplus posion" is the inducement of recrudescent，"residual poison" is the basic pathology of metastasis.Therefor "relieving cancer poison" is the treating principle. .This item extracts baicalein and berberine from Heatoelearing and Detoxiyfing Herbs based on the experience of baicalein cooling upper warmer;berberine rushing down middle warmer, binding the theory of "poison based method" for breast cancer aversion,We regard hepatic or lung metastasis animal model with breast cancer as main research subject. In prophase of the study, we employ comparative proteomics to analyze the differential expression of normal breast tissue and breast cancer tissue (National Nature and Science Foundation of China No. 30500600), apply subcellular proteomics skills to bolter and accredit nuclear matrix protein related to breast cancer metastasis, then further discuss its relationship with EGFR, UPA, TGF-β1 andVEGF. This item proposes a new research field and thinking in anti-metastasis machinism of chinese herbs, also provides an intial scientific connotation for "three warmer identifying"treating cancer.

"毒邪"是贯穿乳腺癌发生、发展和转移始终的病因，肺转移辨证多为毒邪犯肺，阴虚肺燥，肝转移辨证多为毒邪内蕴于肝。清热解毒药清热之中更长于解毒，在祖国医学中一直有治疗肿瘤的报道。传统清热解毒药黄芩偏清上焦肺热，黄连善泻中焦肝热，二者相须配伍有可能在肺、肝转移的治疗方面有所突破。本项目分别选用黄芩黄连的提取物黄芩素与黄连素为干预手段，结合乳腺癌转移从毒论治理论，建立乳腺癌肺、肝转移动物模型，以在基因表达及信号转导途径中起调控作用的核基质蛋白NMP为切入点（国科金30500600),应用亚细胞比较蛋白质组学技术分离、鉴定与黄芩素、黄连素清解癌毒相关的NMP，并探讨其与转移相关蛋白EGFR、UPA、TGF-β1、VEGF的相互关系，探索清热解毒中药抗乳腺癌转移的作用机制，为中药抗肿瘤转移研究提供新的研究思路和方向，并初步为肿瘤三焦辩治提供科学内涵，为进一步研究黄芩-黄连相须配伍治疗肿瘤提供试验基础

背景：黄芩素是一种广泛使用的中草药，近年来研究表明黄芩素具有广谱的抗肿瘤作，然而其抗肿瘤转移的分子机制尚不明确，因此本研究旨通过体内体外实验在探讨黄芩素( Baicalein)对人乳腺癌MDA-MB-231 细胞浸润转移的影响及相关的作用机制。.方法：使用MTT法研究黄芩素对乳腺癌MDA-MB-231 细胞增殖的影响；划痕实验和体外浸润实验验证黄芩素对乳腺癌细胞的浸润和转移的影响作用；体内建立肺肝转移模型验证黄芩素对乳腺癌细胞的转移的影响作用。qRT-PCR 和 Western blot法体内外验证黄芩素SATB1, EMT相关分子, and Wnt/β-catenin 信号通路相关分子的影响。使用免疫组化法验证黄芩素SATB1, EMT相关分子, and Wnt/β-catenin 信号通路相关分子影响。.结果： 黄芩素抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖，浸润和转移呈时间和剂量限制性的。体内实验验证，黄芩素抑制乳腺癌细胞的转移；黄芩素抑制 vimentin ， SNAIL 和E-cadherin；并下调Wnt1和 β-catenin 蛋白及相关的靶基因。.结论：黄芩素可能通过抑制SATB1的表达，下调Wnt/β-catenin通路活性，两者协同抑制EMT发生而发挥其抗肿瘤作用，这将为黄芩素抗肿瘤的研究增添新的基础理论依据，为寻找安全有效的抗癌药物提供新的思路。