基于RCT途径和脾主运化理论探讨HDL亚类抗AS作用机制

高密度脂蛋白（HDL）抗动脉粥样硬化(AS)的主要机制是促进了巨噬细胞胆固醇逆转运（RCT），这种保护作用直接与其亚类结构和功能有关，但目前无有效的表达方法和治疗措施。我们前期研究发现：HDL亚类中HDL1呈孤立分带、HDL5呈特殊分叶状、临床上HDL-c降低的患者普遍存在脾气虚证候。结合中医对AS病因病机的认识，我们提出"RCT与脾主运化相关联"的假说。本项目基于这一假说，应用血清脂蛋白谱（SLPG）检测新方法，针对HDL特殊亚类的颗粒特性和功能进行深入研究。选用具有健脾益气活血作用的中药干预高脂血症AS动物模型，动态观察其HDL1-5的变化及量化平衡关系，并结合代谢组学技术分析实验动物经中药干预后所获得的特征性生物标志物，将宏观药效指标和内源性代谢物的动态变化，作为HDL代谢和药效学的评价手段，阐明基于RCT通路的HDL抗AS作用机制，为研发提高和促进HDL功能的中药新药提供线索。

本项目在前期研究基础上，动态观察实验动物和冠心病病人的血清高密度脂蛋白及其亚类HDL1-5的变化及量化平衡关系，并运用代谢组学技术分析实验动物经中药干预后获得的特征性生物标志物，将宏观药效指标和内源性代谢物的动态变化作为HDL代谢和药效学评价手段，阐明基于RCT通路的HDL抗AS作用机制。本课题首先将健脾益气活血中药（正脂方）通过醇取方法提取有效成份。参照文献中高脂血症家兔动物造模方法进行造模，成功复制了高脂血症动物模型，对空白组、模型组、水煎液组、提取物组、阳性对照组进行实验对照研究，并根据时间段分次采血取得标本。通过实验动物的血脂检测数据分析，证实正脂方能有效升高实验动物家兔的血清HDL水平和改善HDL亚类的量化平衡关系，对实验动物家兔的主动脉粥样硬化斑块有一定的抑制作用，完善了SLPG检测方法的系列验证，为后续研究及推广应用提供了依据，达到了预期目标。同时通过收集实验动物（家兔）尿液及血液，以飞行质谱为研究手段进行代谢组学的研究，分析所得数据、筛选出了影响较大的作为候选内源性特征性代谢物，但由于代谢组学信息量巨大、数据处理非常复杂，我们虽发现了造模前后组别分类明显，有一些可能的生物标记物，但具体是什么物质，目前仍在在进行标志化合物的鉴定工作，我们作了很多努力，但鉴定结构非常困难，还需要做补充实验。在本项目的研究中，我们还对脾虚冠心病和非脾虚冠心病患者进行血清脂蛋白谱检测，研究结果显示，HDL(V)含量在CHD脾虚组处于较低的水平，并在冠脉狭窄严重病变（GS>60）的情况下降低得更明显，提示HDL(V)可能主要作用于RCT的始动环节，促进外周血管部位的细胞胆固醇流出，该环节发生异常可能直接与CHD的发病和冠脉急性事件的发生有着密切的关系，而HDL(V)含量异常降低可能为此提供一种特异性较好的预警作用。我们通过动物实验和临床验证方法证实了血清HDL亚类的颗粒特性和功能是其抗动脉粥样硬化保护机制的关键，我们认为观察HDL1-5 颗粒特性、量化平衡关系及其对泡沫细胞chol 流出的影响，有助于阐述“HDL 亚类的比例分布与胆固醇逆转运”间的关联性，验证了“RCT与脾主运化相关联”的假说，“健脾益气活血”中药能升高HDL-C 以防治AS，为研发调节RCT的治疗药物和防治冠心病提供了一定的线索。本课题已发表中文核心期刊4篇，已撰写相关研究论文3篇，论文正在投稿中。