艾滋病患者泪液中HIV-1病毒的基因分析和感染活性研究

HAART is an effective modality to control HIV-1 viral replication, yet a strategy to eradicate HIV virus, due to the continuous release of viruses from viral reservoir or compartment structures pre-existed in patients. The applicant's previous results published in AIDS, the issue of September, 2011, uncovered that HIV-1 viral load and genetic fragments were detectable in tears of patients under HAART, even when the plasmatic viral load was undetectable. These results indicated a possibility that the virus was released from a newly discovered reservoir. In this research, a continuous study would be further conducted to obtain more sequences of HIV genes, followed by a sequence comparison between obtained typic/subtypic sequences from tears and those obtained from plasma and PBMC using RT-PCR technologies, aiming to clarify the bona fide origination of HIV-1 virus in tears. Meanwhile, host cell moleculars containing co-receptor would be detected by immuno-histochemistry to discover the mechanism of HIV life cycle in eyes and their accessorial organ and tissue. Collectively, this project would focus on particular viral features of HIV found in tears through further investigating viral origination, to search for proofs of the existence of a novel HIV viral reservoir.

联合抗病毒治疗能有效地控制HIV-1病毒复制，却不能彻底清除HIV病毒。这是由于在患者体内存在HIV的病毒储藏库或区室化（compartment）结构，能持续释放出新的病毒。申请人的前期工作显示：在接受HAART的艾滋病患者中，血浆中已检测不出HIV载量，但泪液中仍能查到较高的HIV-1载量（研究发表在2011.9的《AIDS》杂志上），提示病毒的存在可能来源于新型储藏库。本项目将继续开展研究，分析泪液中HIV病毒基因的可能来源。具体包括获得尽可能多的泪液HIV病毒基因的序列，获得共用序列和准种序列与血浆、PMBC来源基因序列分析比较，分析泪液中HIV病毒的可能来源，判断病毒的完整性。研究泪液中HIV病毒可能的宿主细胞的分子基础。总之，本课题将从病毒基因序列和存活和复制的宿主分子基础两方面研究泪液中HIV病毒的特性，为探索新型HIV病毒储藏库提供新的思路。

本研究共采集了23例艾滋病患者的泪液，验证了在病毒完全抑制的患者泪液中存在HIV-1病毒，且病毒载量的高低与患者基线的CD4计数、血浆病毒载量没有相关性，和长期治疗后的患者的CD4细胞计数也没有相关性。提示泪液中HIV-1病毒的含量至少在一定程度上独立于血浆和PBMC中病毒的水平变化。其次，通过RT-PCR扩增泪液中HIV-1病毒基因，获得了部分HIV-1病毒基因的序列，并与患者自身的血浆和PBMC中的病毒序列比对后发现，来自泪液中的HIV-1病毒序列之间相互的序列同源性很高，4例患者泪液病毒分析均为B亚型，和患者自身血浆及PBMC中的病毒并不一致，提示泪液中HIV-1病毒可能是在患者感染早期就和血液系统中的HIV病毒产生了差别。此外，本研究还发现病毒完全被抑制的艾滋病患者泪液中检测到HIV病毒的p24抗原的存在，提示在泪液中很可能存在完整的HIV-1病毒颗粒。最后，通过免疫组化的方法首次发现泪腺上皮细胞中能表达HIV-1病毒的辅助受体CXCR4分子，这为解释泪液中HIV-1病毒的来源提供了新的研究方向和思路，也提示泪腺或者眼睛等器官或组织有可能存在HIV-1复制存活所需的新的compartment或新的病毒储藏库。