调控荷瘤小鼠MDSC增殖及分化的miRNA的筛选及鉴定

髓系来源抑制性细胞（MDSC）实质为未分化的髓系造血细胞，大量存在于肿瘤机体中，它能通过多种途径诱导肿瘤免疫耐受并促进肿瘤转移。我们前期研究发现LLC荷瘤小鼠脾脏中有大量MDSC聚集，较正常小鼠中同类细胞分化明显差。肿瘤机体中促使MDSC大量增殖并阻止其分化的基因调控机制尚不清楚；研究发现miRNA在调控髓系造血细胞增殖及分化中具有重要作用。因此，MDSC的增殖及分化亦应受miRNA的调控。本项目将MDSC分为G-MDSC及M-MDSC两大亚群作为研究对象，通过基因芯片技术比较筛选荷瘤小鼠与正常小鼠脾脏MDSC中差异表达的候选miRNA，构建表达载体，转染MDSC及其前体细胞，使其过表达候选miRNA；S17基质细胞体外培养及骨髓移植实验鉴定候选miRNA对MDSC增殖及分化的影响。生物信息学及双荧光素酶实验预测并鉴定目标miRNA的靶基因。研究结果将部分揭示调控MDSC增殖和分化的机制。

髓系来源抑制性细胞（MDSC）实质为未分化的髓系造血细胞，大量存在于肿瘤机体中，它能通过多种途径诱导肿瘤免疫耐受并促进肿瘤转移。MicroRNAs具有调控骨髓造血细胞增殖与分化的作用。故MDSCs的增殖与分化很可能受microRNAs调控，筛选出调控MDSCs增殖与分化的microRNA及其靶基因有助于开发调控MDSCs增殖与分化的靶向药物。我们研究发现LLC肺癌荷瘤小鼠脾脏中有大量MDSC 聚集，其中G-MDSCs及M-MDSCs的比例均是正常小鼠的6倍，且荷瘤小鼠脾脏比正常小鼠脾脏明显增大。鉴于G-MDSCs及M-MDSCs具有一些不同的生物学特性，其microRNA表达谱亦可能不同。我们将LLC荷瘤小鼠的G-MDSCs及M-MDSCs亚群分开行microRNA芯片检测。与正常小鼠的G-MDSCs及M-MDSCs相比，两亚群具有不同的microRNA表达谱。我们用生物信息学预测可能调控G-MDSCs及M-MDSCs增殖与分化的microRNA及其靶基因。并且在LLC荷瘤小鼠及B16黑色素瘤小鼠G-MDSCs及M-MDSCs中用qRT-PCR进行验证，发现miR-350及其靶基因IL10可能参与肿瘤诱导的G-MDSCs的增殖与分化，而miR-486及其靶基因Cebpa可能参与肿瘤诱导的M-MDSCs的增殖与分化，我们已经构建了表达miR-350及miR-486的慢病毒表达载体，其功能验证正在进行。此外，我们还发现，miR-192在肿瘤诱导的G-MDSCs及M-MDSCs中均高表达，其在调控MDSCs中的作用及机制有待进一步研究。