生防菌Hhs.015防治苹果腐烂病的机理研究

苹果树腐烂病是我国苹果产区主要病害，现有防治措施都是使用化学农药，这不但容易使病原菌产生抗药性，而且对环境造成严重污染。为了对该病害进行安全持续控制，进行生物防治是一个有效而安全的防治措施。我们实验室经过室内、温室和田间试验，筛选到一株内生放线菌Hhs.015，它对苹果腐烂病具良好防治效果，具有用来进行苹果腐烂病生物防治的潜力。本项目拟对Hhs.015进行绿色荧光蛋白标记，研究其施用于温室苹果组培苗和田间自然生长的果树后在树体内的定殖和消长规律；并利用实时荧光定量PCR技术检测组织中对病菌存活的影响；利用组织细胞学技术观察生防菌对苹果腐烂病菌生长发育的影响；进而通过生理生化方法研究生防菌对苹果树系统诱导抗性，探索Hhs.015防治苹果腐烂病的作用机制。该研究将为Hhs.015应用在苹果腐烂病生物防治实践提供理论依据和参考。

苹果树腐烂病是我国苹果产区主要病害，为了对该病害进行安全持续控制，生物防治是一个有效而安全的防治措施。本项目对生防放线菌Hhs.015进行了绿色荧光蛋白遗传标记，研究其施用于苹果组培苗后在植物体内的定殖和消长规律，发现菌株Hhs.015在植株体内可以定殖，且呈先增后减的趋势；建立了以G6PDH为靶标的特异性qPCR体系用于检测使用Hhs.015对病斑形成前后树皮样品中V. mali数量变化，检测结果表明Hhs.015可以显著减少病斑形成前的树皮样品中V. mali总数量，但对病斑形成后的病健交界处树皮样品中V. mali数量没有影响。使用Hhs.015可显著地降低内切多聚半乳糖醛酸酶基因的表达，并显著地增加胼胝质合成酶基因的表达,促进植物防卫；对涂抹Hhs.015病健交界处树皮样品中胼胝质积累进行了组织学观察，发现筛管中出现大量胼胝质积累，与定量结果一致。与Hhs.015皿内对峙条件下的V. mali菌丝的亚细胞结构进行观察结果表明20h时，V.mali菌丝出现细胞壁破裂、横隔和晕圈；24h时，细胞核降解,线粒体数量增多，并出现线粒体聚集与膨大现象；48h时，菌丝细胞壁加厚，细胞质几乎全部降解并形成大的空液泡，细胞核与细胞质完全分离并出现细胞核的完全降解。该研究阐明了Hhs.015防治苹果腐烂病的部分作用机制，将为Hhs.015应用在苹果腐烂病生物防治实践提供理论依据和参考。