维甲酸调控CD2AP转录水平的分子机制

CD2相关蛋白（CD2AP）表达下降与肾小球硬化相关，维甲酸可治疗肾小球硬化。我们的预实验发现维甲酸可通过CD2AP启动子区Sp位点提高CD2AP转录水平和启动子活性，但机制不详，本项目将在不同细胞中通过多种维甲酸刺激分析CD2AP启动子功能，明确哪几个Sp位点对维甲酸的影响起作用；凝胶迁移试验观察维甲酸对Sp转录因子与启动子结合的影响；RNAi、转录因子诱骗、过表达、阻断药物和无Sp细胞论证Sp在介导维甲酸的调控中的作用；体内实验用染色质免疫沉淀法分析维甲酸对Sp与启动子的结合、对Sp所募集的维甲酸核受体亚型的种类、对复合物与启动子结合的影响，敲低或拮抗维甲酸核受体研究其在介导维甲酸对CD2AP调控中的作用。本研究将有助于揭示维甲酸调控CD2AP转录的分子机制，有可能发现维甲酸调控CD2AP的新信号通路，为实施优化的维甲酸治疗肾小球硬化策略提供实验依据，具有重要的理论意义和临床应用前景。

维甲酸是一种维生素A的活性代谢产物，在调节细胞分化、增殖和凋亡中起重要作用。有报道全反式维甲酸可上调肾病动物的CD2相关蛋白的表达，但维甲酸介导上调的机制尚不清楚。许多研究表明肾脏疾病时CD2相关蛋白表达下降。我们开展了缺失突变和萤光素酶分析论证了维甲酸引起CD2相关蛋白启动子活性的显著性增高，CD2相关蛋白转录起始位点上游从核苷酸-599 bp到-328 bp的区域中两个Sp1/Sp3结合位点，对维甲酸介导的上调是必不可少的，维甲酸能显著上调过表达维甲酸受体RARα及RXRα的CD2AP启动子活性。染色质免疫沉淀分析发现维甲酸通过加强转录因子Sp1和Sp3与CD2AP启动子的结合激活CD2相关蛋白的转录。这一研究首次提供了多种维甲酸对CD2相关蛋白转录的上调作用及其机制，明确了CD2AP基因上游转录调控通路的成员，为肾病综合征和其他CD2相关蛋白表达下降有关疾病的治疗提供了新的治疗靶标。不同种类的维甲酸在不同的肾脏培养细胞中上述作用的差异为应用基础研究，可为临床治疗与CD2相关蛋白相关的肾脏病取得最佳疗效、避免维甲酸的副作用提供实验数据。该项目的成果对转化为临床个体化治疗有创新意义，对于今后发现的CD2AP启动子区的突变或其他原因导致CD2AP的RNA或蛋白表达下降所致的肾病，治疗策略为上调CD2AP表达时，可探索通过维甲酸上调CD2AP的RNA表达以代偿遗传突变所致的RNA或蛋白表达下降。