两类凋亡基因表达谱不同的人黑色素瘤细胞抗凋亡分子机制的差异研究

黑色素瘤是我国近年来发病率上升最快的肿瘤之一，它恶性程度高，易转移，对诱导凋亡的各种放、化疗和生物治疗具有高抵抗性和低反应性，其发生、发展与线粒体异常密切相关。申请者前期利用线粒体功能基因芯片检测了21种人黑色素瘤细胞基因表达谱，根据有差异表达的355个基因将它们分为两类，发现38个凋亡相关基因在两类细胞的表达谱截然相反，故提出假说:人恶性黑色素瘤细胞抗凋亡存在两种不同的分子机制。为验证这一假说，拟从两类细胞中各选择两种细胞A375、COLO829和UACC903、MUM2C，观察UVC254nm处理后细胞的生长和凋亡情况，线粒体功能基因芯片检测其基因表达谱，分析、比较两类黑色素瘤细胞凋亡调控的分子网络通路，从线粒体角度阐明它们抗凋亡分子机制的差异，并用qRT-PCR、Western blot和siRNA技术从RNA、蛋白质和基因功能学层面验证，为其临床分子分型和靶点药物研发提供理论基础。

黑色素瘤恶性程度高，易转移，对诱导凋亡的各种放、化疗和生物治疗具有高抵抗性和低反应性，其发生、发展与线粒体异常密切相关。申请者根据前期研究结果提出假说:人恶性黑色素瘤细胞抗凋亡存在两种不同的分子机制。为了验证项目假说，项目研究选择A类细胞(A375，COLO829)和B类细胞(UACC903，MUM2C)， UVC254nm处理后观察细胞的生长和凋亡情况，结果显示A类细胞对UVC254nm的抗性低于B类细胞；线粒体功能基因芯片检测UVC254nm 100J/m2处理后细胞基因表达谱，结果显示84个凋亡相关基因中有35个凋亡相关基因在经UVC254nm处理的两类黑色素瘤细胞表达谱相反；与UVC254nm处理前38个凋亡相关基因在两类黑色素瘤细胞表达谱相反相比，16个凋亡相关基因表达强度无变化，35个凋亡相关基因表达强度发生变化；分析在两类黑色素瘤细胞表达谱相反35个凋亡相关基因，结合细胞凋亡的分子调控通路，证实了两类黑色素瘤细胞的凋亡是由不同的基因群组调控；siRNA沉默在两类黑色素瘤细胞表达差异的抗凋亡基因BCL2和促凋亡基因ENDOG，结果显示siRNA沉默前后同种细胞的生长和凋亡差异较大，但对两类黑色素瘤细胞生长和凋亡影响的差异性小。项目观察了UVC254nm处理后黑色素瘤细胞的生长和凋亡情况，分析、比较了两类黑色素瘤细胞凋亡调控的分子网络通路，从线粒体角度初步阐明了它们抗凋亡分子机制的差异，证实了项目假说人恶性黑色素瘤抗凋亡存在两种不同的分子机制，并从RNA、蛋白质和基因功能学层面进行了验证。