化瘀涤痰通络法拮抗肾间质纤维化的机制研究：调控肾上腺髓质素抑制上皮细胞表型转化？

Tubular epithelial cell-myofibroblast transdifferentiation (TEMT) formed by the interaction of several factors which plays the important role in renal fibrosis. Inhibit the transformation processes can reduce the damage of kidney disease.Earlier research confirms adrenomedullin (ADM) has the effect to inhibit TEMT. Inhibit TEMT, and other ways of Traditional Chinese Medicine may be associated with regulation of ADM. In this study, "Long illness into complex" as the theoretical basis, basis for validation to clinical efficacy, "Shenluoyuzu" as the pathogenesis of stagnation, to removing blood stasis, resolving phlegm and dredging to treat rule, ADM as the regulating genes and renal tubular epithelial cells as the target. Unilateral ureteral ligation in animals and treated with Traditional Chinese Medicines to study its effects on Alpha-SMA, AngII-TGF beta 1 and Smads, inflammatory mediators as IL-1,TNF-αand MCP-1 and NF-κB, the oxidative stress markers as ROS, LOX-1,NADPH and MARKs, then expound the role of TCM on TEMT and ADM. The gene knockout, receptor block and ADM administration are used to confirm the effect of ADM and TCM on TEMT.

肾小管上皮细胞表型转化由多种因素共同作用而形成，在肾间质纤维化进展中有重要的意义,抑制其转化可减缓肾脏病的进程。前期研究证实肾上腺髓质素（ADM）有抑制肾小管上皮细胞表型转化（TEMT）的作用，中药抑制细胞表型转化的作用与调控ADM有关。本研究以"久病入络"为理论依据，以临床疗效为验证依据，以肾络瘀阻为病机，以化瘀涤痰通络为治疗法则，以ADM为调控基因，以肾小管上皮细胞为靶点，采用内源性阻断（基因敲除）、外源性阻断（受体阻断）、外源性增强（ADM治疗）等方式证实ADM对TEMT的作用，观察化瘀涤痰通络中药通过调控ADM对单侧输尿管结扎动物TEMT标志物α-平滑肌肌动蛋白的影响，研究对AngII-TGFβ1及Smads、炎性介质（IL-1、TNF-α、MCP-1、NF-κB）、氧化损伤（ROS、LOX-1、NADPH、MARKs）等途径的调控作用，为化瘀涤痰通络中药的临床应用提供实验依据。

项目背景：慢性肾脏病在我国有明显增多的趋势，发病率达10.8%以上，其最终结局为慢性肾衰竭，病理表现为肾脏纤维化，其中关键的病理改变有细胞表型转化，研究其机制及中医治疗，有助于减缓疾病进展并揭示其中医病机。本课题以“久病入络”理论为指导，以临床疗效为依据，结合肾脏病理，总结名老中医经验，基于慢性肾脏病“肾络瘀阻”病机学说，采用化瘀涤痰通络治法，观察中药肾络通对梗阻性肾病实验动物肾小管上皮细胞表型转化的作用，研究其作用机制以及与肾上腺髓质素的关联。.主要研究内容、重要结果和关键数据：本研究分别采用Wistar大鼠和肾上腺髓质素基因敲除小鼠，结扎单侧输尿管（UUO）复制肾间质纤维化实验动物模型，给以醛固酮受体阻断剂依普利酮及中药肾络通治疗，观察肾脏病理改变、细胞表型转化及机制。实验证实以下结果： ①UUO实验动物出现明显的肾小管上皮细胞表型转化，表现为α-SMA阳性细胞表达增多，与肾间质纤维化密切相关； ②UUO可诱导梗阻侧肾脏醛固酮活化，继而产生炎性损伤和氧化应激，刺激细胞表型转化和凋亡；③ 肾上腺髓质素与细胞表型转化相关，小管上皮细胞表型转化在基因缺失状态UUO后更为显著；④ 化瘀涤痰通络中药肾络通及醛固酮受体阻断剂依普利酮均可通过抑制肾小管上皮细胞表型转化减缓肾脏纤维化的进展；⑤ 肾络通可以调控Smads信号通路表达纠正促纤维化因子TGF-β1的失衡，抑制细胞的表型转化；⑥ 肾络通可以上调肾上腺髓质素的表达，通过抑制细胞表型转化、细胞增殖等减轻肾脏损伤；⑦ 梗阻性肾病可以通过醛固酮活化并影响对侧（健侧）肾脏，诱导细胞增殖等改变，醛固酮受体阻断剂依普利酮及中药肾络通可有效抑制细胞增殖，保护对侧肾脏。.科学意义：证实肾小管上皮细胞表型转化在梗阻性肾病中的作用以及与醛固酮活化的关联；验证化瘀涤痰通络中药肾络通及醛固酮受体阻断剂依普利酮抑制细胞表型转化的作用。证实中药肾络通减缓慢性肾脏病的部分作用机制，通过抑制醛固酮活化诱导的炎性损伤和氧化应激，上调体内具有靶器官保护作用的血管活性肽 – 肾上腺髓质素的表达减轻肾间质纤维化。发现梗阻性肾病对侧（健侧）肾脏细胞增殖明显，与醛固酮活化有关，揭示单侧肾脏受损诱导慢性肾衰竭的部分机制，中药肾络通可以抑制细胞增殖保护对侧肾脏损伤，拓展了中医“治未病”理论在慢性肾脏疾病的应用。