具有PCR模板的核酸适配体对肝癌肿瘤早期诊断检测技术的研究

目的：利用具有PCR模板的核酸适配体蛋白质分子定量检测技术对肝癌血清标志物组进行检测，建立肝癌检测技术。.研究内容：利用具有实时定量PCR模板的核酸信息标记的配基传感检测技术（2003年国家自然科学基金资助项目），针对肝癌血清肿瘤标志物，建立血清多标志物分子检测分析体系，通过对多血清标志物分子定量系统检测，提高标志物检测的灵敏度和量效关系的分析，实现对肝癌的血清检测。.1.利用核酸指数级富集的配基进化系统筛选补充肝癌血清标志物；.2.建立多分子血清标志物检测技术；.3.进行临床检测实验研究。.通过对多种肿瘤标志物的分子定量检测及量效关系的分析，实现对肿瘤的检测。

1. 背景.据我国2007年5月公布的统计资料，肿瘤的死亡率排在第一位。而肝癌的高发趋势十分严峻。我国临床就诊的肝癌患者大部分属于中、晚期病人，失去了最佳治疗机会。如能在肿瘤发生的分子水平或基因水平上，特别是在肿瘤血清标志物上发现其存在，从而进行临床干预，延缓肿瘤的发生、或逆转肿瘤的形成，对提高肝癌病人的治愈率和生存率具有非常重要的意义。.本课题利用具有实时定量PCR模板的核酸信标配基传感检测技术，针对肝癌血清肿瘤标志物，建立血清多标志物分子检测分析体系，通过对多血清标志物分子定量系统检测，提高标志物检测的灵敏度和量效关系的分析，实现对肝癌的血清检测。.2. 目的.利用具有PCR模板的核酸适配体蛋白质分子定量检测技术对肝癌血清标志物组进行检测，建立肝癌检测技术。.3. 主要内容.1）利用核酸指数级富集的配基进化系统筛选肝癌血清标志物；.2）建立多分子血清标志物检测技术；.3）进行临床检测实验研究。.4. 重要结果.1）利用核酸指数级富集的配基进化系统筛选了肝癌血清标志物；.2）建立了基于PCR模板的核酸适配体多分子检测技术；.3）建立了高通量琼脂磁珠电泳和双库核酸适配体（SELEX）快速筛选及活性鉴定技术，方便快速筛选特异性核酸适配体，克服了传统使用同位素P32的缺陷（拟申请专利）；.4）建立了琼脂磁珠核酸适配体-靶蛋白制备技术，可方便制备及研究（未知）靶蛋白；.5）建立了利用琼脂磁珠电泳的核酸信标配基实时定量PCR蛋白分子检测技术，可进行微量多种蛋白分子检测（拟申请专利）。.5. 关键数据.1）建立了基于PCR模板的核酸适配体多分子检测技术；.2）建立以琼脂磁珠双库适配体电泳筛选技术；.3）建立以琼脂磁珠为载体的蛋白和基因实时定量-PCR同时检测技术。.6. 科学意义.1）利用以琼脂磁珠双库适配体电泳筛选技术，可完成对蛋白等多种靶分子的快速筛选，其配基特异性高，结合力强。利用核酸信标配基实时定量-PCR检测技术，提高靶分子的检测灵敏度，该技术在生物医学等领域的普及、开发、应用具有重要意义；.2）建立以琼脂磁珠为载体的蛋白和基因实时定量-PCR同时检测技术，该技术便于机械化操作，可为提高生物体内多分子相关性研究及蛋白质组学、基因组学、疾病分子检测监控等领域提供技术支持。