猪喉咽反流模型的建立及造模后喉咽粘膜超微结构和紧密连结蛋白的变化

本研究以和人类喉咽部粘膜及消化系统高度同源的微型猪作为研究对象，分别采取球囊导管扩张/支架置入的方式，分别破坏实验猪食管体部、上、下食管括约肌功能等食管动力屏障，以期建立喉咽反流动物模型，对不同造模方式的实验猪，在不同时间点进行食管动力测定及食管咽部pH监测、喉咽部粘膜的超微结构及紧密连结蛋白表达的变化，以研究不同的造模方式的动物模型的有效性，稳定性，建立急慢性喉咽反流模型，同时观察酸暴露下喉咽粘膜的超微结构和紧密连结蛋白的变化。需要解决的关键问题是不同位置的球囊/支架对食管动力功能的改变及其随时间的变化的改变, 食管动力功能的改变及其对喉咽反流、胃食管反流的影响.本项目创新之处在于喉咽反流动物模型的建立，首次采用支架置入的方式建立反流模型，兼顾了急性反流模型和慢性反流模型的建立；同时在模型上观察酸暴露情况下，喉咽部粘膜超微结构及紧密连结蛋白的变化。

本研究以和同人类喉咽部粘膜及消化系统高度同源的小型猪作为研究对象，采取食管内支架置入的方式，破坏实验用小型猪食管动力屏障，在不同时间点进行喉咽部及食管pH 监测，以期建立喉咽反流动物模型，评价其有效性及稳定性；同时观察造模后喉咽部粘膜的超微结构。实验中采用巴马小型猪共10只，其中对照组和实验者各死亡一只。剩余的8只巴马小型猪平均体重为10.5kg, 身长为66.9cm。其中对照组实验组各四只，各组起始均进行内镜检查，然后进行喉咽部和食管pH监测，同时取喉咽部粘膜。实验组在pH监测完成后，进行食管内支架置入，然后再次监测pH2小时，3天后取出支架。隔10天后再次进行喉咽部、食管pH监测，同时喉咽部粘膜取组织进行细胞间隙分析。结果显示：1. 喉咽部pH监测：各组在起始时无喉咽反流存在，对照组在相隔14天后喉咽部pH监测无变化；而支架组在支架置入后，即刻2小时后即存在喉咽反流（p<0.05), 在支架保存3天，取出支架10天后，仍存在喉咽反流情况，（p<0.05). 2.食管pH监测：各组在起始少许反流存在，对照组在相隔14天后食管pH监测无变化；而支架组在支架置入后，即刻存在明显的胃食管反流（p<0.05), 在支架保存3天，取出支架10天后，仍存在明显的胃食管反流。（p<0.05). 3.喉咽部粘膜细胞间隙变化：对照组2次喉咽部粘膜细胞间隙、及桥粒数目无明显变化,而实验组的喉咽部粘膜细胞间隙增宽，桥粒减少。根据研究结果显示采用食管内支架置入的方式可以建立喉咽反流模型以及胃食管反流模型，由于反流，喉咽部粘膜屏障遭到破坏。