沉默基因Siglec-5的再激活及其抑制T细胞活化的分子机制

T细胞的异常活化是自身免疫性疾病发生的重要环节之一。Siglec-5分子在黑猩猩T细胞高表达并能抑制T细胞的过度活化，但在人类T细胞进化中表达沉默。我们发现了一个能激活人类T细胞Siglec-5表达的新分子，该分子是人T细胞淋巴样增强因子（LEF-1）基因发生终止码通读翻译后产生的通读体。该通读体含有一个能与Siglec-5 启动子结合的HMG-BOX 功能域和两个能与转录激活因子作用的LXXLL功能域。本项目拟采用DNA酶足迹法和染色质组装技术研究该通读体与Siglec-5启动子的结合以及对染色质的活化作用；利用酵母双杂交等方法研究与通读体作用的转录激活因子进而阐明再激活Siglec-5的信号通路；采用基因突变等方法研究Siglec-5抑制T细胞活化的分子机制。本项目为研究人类T细胞异常活化及Siglec-5信号通路的表达调控提供了新的思路，并为治疗自身免疫性疾病药物的研发提供新的靶点。

项目的研究背景：. 唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素(Siglecs)是一类以跨膜形式表达于免疫细胞表面的受体。Siglec-5 属于CD33相关的一种Siglecs。人Siglec-5含有一个N-端Ig-V区和三个Ig-C2区以及C-端的ITIM/SAP的细胞内信号抑制调节区。Siglec-5主要表达在外周血单核细胞、中性粒细胞及B细胞，在T细胞表达沉默。Siglec-5的主要功能是抑制免疫细胞的活化，其表达水平的异常参与了免疫细胞功能失调及人类免疫功能紊乱相关疾病的发生与发展。.主要研究内容：.1．影响人Siglec-5表达的调控因子：本项目首先研究了人类转录因子LEF-1的通读体对Siglec-5表达的激活作用，然后对人T细胞Siglec-5表达沉默的原因也从其启动子甲基化修饰以及相关microRNA的机制上进行了研究。.2．全反式维甲酸(ATRA)及其受体(RXR)在Siglec-5表达调控中的作用研究：发现了Siglec-5的启动子序列含有多个RXR的结合位点 （AGGTCA）；研究了RXR受体激动剂 ATRA及其衍生物对Siglec-5启动子活性的影响；研究了这些化合物对U937中性粒细胞Siglec-5表达的影响。.3．ATRA及其衍生化合物调节Siglec-5在感染性免疫中的作用研究：研究了ATRA及其衍生化合物在中性白细胞对抗链球菌感染中的作用及机制，探讨了这些化合物对肝硬化晚期白细胞Siglec-5表达以及细胞免疫功能的影响。.重要结果：.1．影响人Siglec-5表达的调控因子：.1．1．人类转录因子LEF-1的通读体对Siglec-5表达具有一定的激活作用；.1．2．Siglec-5启动子区的甲基化不明显，但是存在着A>G的转换；.1．3．miR-34a在Siglec-5的表达沉默中起一定作用。.2．ATRA及其衍生物在Siglec-5的表达调节中作用明显；ATRA作为RXR受体的反式激动剂抑制Siglec-5的表达；.3．ATRA通过抑制Siglec-5的表达增强了免疫细胞的呼吸爆发能力，同时减少了IL-6的产生;甲胎蛋白(AFP)具有增加Siglec-5表达的作用。.关键数据及其科学意义：ATRA抑制Siglec-5的表达增强了免疫细胞的抗感染作用，同时减少炎症损伤。本研究为ATRA抗感染及免疫紊乱相关疾病的治疗提供了理论基础。