体外培养的骨髓间充质细胞的衰老、自噬机制研究

骨髓间充质细胞（MSCs）是具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，在再生医学中作为生物材料已用于治疗骨病、心肌梗塞、脑中风等损伤性疾病的动物实验中，并取得一定的疗效。但是，在我们的实验中，观察到连续传代的MSCs其生长经过"快速增殖→生长停滞→恢复快速增殖"这一现象，经β-半乳糖苷酶染色，发现生长停滞阶段的MSCs存在大量染色阳性的衰老细胞。本项目以MSCs衰老现象入手，研究p53及其上下游基因在MSCs衰老中的作用机制。同时研究"细胞自噬"在衰老中作用，探讨MSCs衰老、自噬的共同靶标p53的作用机制和不同阶段细胞因子的作用，为延缓MSCs的衰老提供可行性。本项目采用RNA干扰、RT-PCR等分子生物学、基因芯片结合形态学技术，为实验数据提供可靠的保证。如细胞自噬运用到抗MSCs的衰老上，"年轻"的MSCs作为细胞移植和组织工程种子细胞在再生医学中应用将具有广泛的前景。

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）具有较强的自我更新和多向分化能力，已经在组织工程领域显示了广泛的应用前景。MSC同其他成体细胞一样，经过大量扩增后，细胞停止增殖，成为衰老的细胞。细胞自噬是细胞对细胞胞浆成分的降解与循环再利用的过程，已有的研究发现在衰老相关的疾病中存在自噬水平的增加，这提示衰老与自噬是两个紧密相关的过程。p53是衰老调控的关键蛋白，同时p53的增加可以引起细胞的自噬，那么p53很可能在引起MSC衰老和自噬中起重要角色。.本研究根据MSC体外培养复制性衰老的过程，发现自噬水平在衰老的MSC中增加；通过自噬抑制试验证实，细胞自噬参与到MSC衰老的过程。为了分析p53的作用，我们采用了慢病毒介导的p53干扰试验，我们发现在干扰p53的表达后，MSC的衰老水平降低，同时细胞的自噬水平也下降。这也证实了p53蛋白是MSC衰老和自噬的共同靶点。MSC衰老进程需要细胞自噬机制的参与，那自噬过程的如何作用与细胞衰老的？我们认为是自噬过程合成的细胞因子对衰老起稳固作用，这是我们下一步的研究方向。