缺氧诱导肝癌上皮间质化及机制研究

肝癌的复发转移是制约患者生存率提高的瓶颈，而癌细胞的上皮间质化（EMT）使其获得了更强的侵袭性和游走迁徙能力，故是影响肝癌复发转移的重要原因。目前国内外对原发性肝癌的EMT问题研究尚处于初级阶段，对参与EMT的微环境和细胞分子通路等问题均不清楚。本课题在前期研究中发现缺氧培养而非TGF-β1可以诱导不同肝癌细胞株发生EMT，结合国内外相关研究结果，首先提出缺血缺氧状态是发生EMT 的始动因素的猜想。并拟通过尝试不同生物学特性的肝癌细胞株和原代肝癌细胞的缺血缺氧条件下体外二维/三维培养及化学诱导小鼠肝癌等不同的实验技术进一步证实。并在该猜想成立的基础上，结合我们既往的研究结果，以mTOR通路作为干预的首选靶点，采用慢病毒质粒转染和基因敲除等手段进一步深入寻找干预肝癌EMT 的多个可能靶标。研究结果不仅更加丰富肝癌EMT的理论，更为今后控制肝癌的复发转移，提高远期生存率的转化医学奠定基础。

在国家自然青年基金资助下，我们顺利完成了课题原计划完成的内容。我们通过实验证实Wnt/β-catenin可以通过hif-1α活性促进低氧诱导EMT发生，并抑制细胞凋亡。增强低氧上皮间质化（Epithelial–mesenchymal transition，EMT）参与肿瘤的侵袭转移过程。在很多肿瘤中，低氧都可以诱导EMT，同时上调β-catenin的表达。我们研究了β-catenin在低氧诱导肝癌EMT中的作用。我们发现，低氧可以诱导EMT，低氧诱导的EMT可以被β-catenin的激动剂Wnt3a进一步增强，而siRNA阻断β-catenin后可以有效阻断低氧诱导的EMT发生。同时我们发现，β-catenin可以与Hif-1α结合，并与T细胞样因子4（TCF-4）竞争性结合；激活Hif1α可以增强低氧诱导的EMT发生，敲除Hif-1α可以阻断β-catenin介导的EMT发生。进一步我们发现，β-catenin在维持低氧环境中肝癌细胞的活性和增殖中发挥重要作用。在人类标本中，我们也发现β-catenin、Hif-1α和肝癌细胞EMT表型三者存在相关性。