冠心病血瘀证相关基因组学分析及龙脉宁方对靶基因调控网络研究

Compound Long Mai Ning is used to treat cardiocerebrovascular diseases, with the main actions of dredging meridians and activating collaterals to remove blood stasis and toxin. Based on the correlation among CHD, blood stasis and inflammation, we have done the researches via modern gene mapping technology with the inclusion of the previous studies, we put forth the hypothesis：abnormal gene network expression may play a leading role in the occurrence and development of CHD due to blood stasis. Long Mai Ning may regulate the target gene network against CHD due to blood stasis. Because of this, on the previous studies of this project, we adopted the technologies of mapping analysis of gene expression difference, etc. based on the blood stasis- inflammation theory in combination with basic TCM theories. Meantime, we replicated the animal models of CHD due to blood stasis to observe the inflammatory injury and dysfunction after the occurrence of CHD, explore the material basis of the efficacy of Long Mai Ning. Simultaneously, we adopted the gene chip technology to reveal the action mechanism of Compound Long Mai Kang during the prevention of CHD due to blood stasis. This is to provide the theoretical basis for the clinical administration of Compound Long Mai Ning, to provide the scientific basis for the clinical treatment of CHD due to blood stasis, and further to supply original thinking and methods for deeper researches on TCM prescriptions.

复方龙脉宁方用于治疗心脑血管疾病，主要具有通络活血、化瘀解毒临床作用。本项目基于冠心病、血瘀证、炎性反应的关联性，借助现代基因图谱技术，在复方龙宁前期研究基础上，进一步提出了新的研究假说:基因网络异常表达可能在冠心病血瘀证事件发生发展中起关键作用，龙脉宁方调控靶基因网络抗冠心病血瘀证。鉴于此，本项目在前期研究基础上，结合中医药基础理论，基于血瘀-炎症理论，采用基因表达差异谱分析等技术方法，同时通过复制冠心病血瘀证动物模型，观察冠心病后炎性损伤和功能障碍，探索复方龙脉宁方有效物质基础；并采用基因芯片技术揭示复方龙脉宁方防止血瘀型冠心病的作用机理，为复方龙脉宁的临床合理用药提供理论依据，为中医的临床治疗血瘀型冠心病提供科学依据，进而为中药类方的深入研究提供新的思路和方法。

复方龙脉宁方用于治疗心脑血管疾病，主要具有通络活血、化瘀解毒临床作用。目前关于其药效物质基础和治疗作用机制鲜有报道，本研究以体外在体动物实验和细胞实验研究其药效物质基础，结合转录组测序（RNA-seq）技术研究复方龙脉宁汤剂对急性心肌梗死的保护作用及其机制。体外考察葛根、葛根-穿山龙、葛根-川芎和复方龙脉宁4种汤剂在十二指肠、空肠、回肠和结肠中葛根素的吸收情况，结果表明复方龙脉宁中表明在大鼠全肠段中，复方龙脉宁汤剂对葛根素的吸收有明显的促进作用。采用MTT法检测复方龙脉宁水提液含药血清5%、10%、20%组及复方龙脉宁醇提液含药血清5%、10%、20%组分别对氧化损伤的H9c2心肌细胞的活性，当H2O2浓度为100μmol·L-1，作用时间为24h时，可建立稳定的H9c2心肌细胞氧化损伤模型；与正常对照组相比，H2O2处理后细胞活性明显下降，SOD活性显著降低，而 LDH 活性、MDA 含量则显著增加。复方龙脉宁水提液含药血清10%、20%组和CLMN醇提液含药血清10%、20%组可显著提高细胞存活率及 SOD活性，而显著降低 LDH 活性、MDA 含量。RNA测序结果显示复方龙脉宁汤剂对急性心肌梗死过程中的51个基因具有调控作用，KEGG Pathway分析结果显示51个差异表达基因富集在7条信号通路中。本实验选择趋化因子信号通路和白细胞跨内皮迁移信号通路中的趋化因子6（Ccl6）、趋化因子受体5（Ccr5）、整合素（Itgam）、中性粒细胞胞质因子1（Ncf1）和基质金属蛋白酶9（Mmp9）进行qPCR验证，数据显示qPCR定量分析结果与RNA测序结果一致，表明RNA测序结果可靠。复方龙脉宁汤剂可能通过调控Ccl6、Ccr5、Itgam、Ncf1和Mmp9的表达，抑制趋化因子信号通路和白细胞跨内皮迁移信号通路，从而对急性心肌梗死发挥保护作用。