黄芩苷对急性脑缺血后凝血酶毒性损伤机制的干预研究

急性脑缺血后脑组织的凝血酶原mRNA表达增强，凝血酶生成增多，高浓度的凝血酶通过凝血酶受体（PAR-1）发挥细胞毒性作用，与脑水肿、炎症反应、细胞凋亡及兴奋性氨基酸毒性损伤等病理因素密切相关。根据中医理论和现代医学研究，提出"中风热毒论"观点，认为热毒损伤脑络是中风病发生的主导病机之一。临床应用黄芩为主药的清热解毒方剂治疗急性缺血性脑血管病获得明显疗效；实验研究发现，黄芩苷对急性脑缺血后的神经细胞具有保护作用。本项目在以往充实的研究工作基础上，以大鼠大脑中动脉线栓法复制急性脑缺血模型和大鼠皮层神经细胞培养建立凝血酶损伤模型，给予黄芩苷干预，应用RT-PCR、Wsetern Blot和免疫组化法等检测神经元凝血酶原mRNA、PAR1mRNA和PAR1等指标表达的变化，首次从"热毒学"角度探讨黄芩苷对急性脑缺血后凝血酶毒性损伤机制的干预作用，为中医药治疗急性缺血性脑血管病提供新的实验研究基础。

急性脑缺血后脑组织的凝血酶原mRNA表达增强，凝血酶生成增多，高浓度的凝血酶通过凝血酶受体（PAR-1）发挥细胞毒性作用，与脑水肿、炎症反应、细胞凋亡及兴奋性氨基酸毒性损伤等病理因素密切相关。根据中医理论和现代医学研究，提出“中风热毒论”观点，认为热毒损伤脑络是中风病发生的主导病机之一。临床应用黄芩为主药的清热解毒方剂治疗急性缺血性脑血管病获得明显疗效，黄芩苷是中药黄芩的主要有效成分，实验研究发现，黄芩苷对急性脑缺血后的神经细胞具有保护作用。.本项目在以往的研究工作基础上，为明确黄芩苷对急性脑缺血后凝血酶毒性损伤的干预机制，计划从体内和体外实验进行研究。体内实验，以大鼠大脑中动脉线栓法成功复制急性脑缺血模型后，给予小、中、大剂量的黄芩苷（25mg/kg, 50 mg/kg, 100mg/kg）干预，在脑缺血后1d,3d和7d应用Wsetern Blot、RT-PCR和免疫组化法等检测神经细胞PAR1和PAR1mRNA 、MMP-9 、NMDA-R1、 Caspase-3及NF-κB等指标表达的变化，并应用伊文斯蓝法观察血脑屏障通透性变化，在光镜下观察缺血脑组织神经细胞病理形态学的变化；体外实验，以人类神经细胞母瘤细胞（SH-SY5Y）为研究对象，在缺糖缺氧环境下培养10h后，给予一定剂量的凝血酶后培养4h，造成凝血酶毒性损伤模型，在缺氧缺糖培养前2h开始给予不同浓度的黄芩苷（0.1mmol/l, 1mmol/l,10mmol/l）干预，应用Wsetern Blot和RT-PCR法等检测神经细胞PAR1和PAR1mRNA、NMDA-R1 、Caspase-3及NF-κB等指标表达的变化。研究结果显示，黄芩苷通过抑制脑缺血和凝血酶损伤后神经细胞PAR1和PAR1mRNA 、MMP-9 、NMDA-R1、 Caspase-3及NF-κB等的表达，显示黄芩苷具有抑制凝血酶毒性、抗细胞凋亡、减轻炎症反应和兴奋性氨基酸毒性损伤、降低血脑屏障通透性等神经保护作用，且其神经保护效果呈剂量依赖关系，大剂量的黄芩苷效果优于中剂量和小剂量。.本研究首次从"热毒学"角度探讨黄芩苷对急性脑缺血后凝血酶毒性损伤机制的干预作用，发现了黄芩苷通过抑制神经细胞凝血酶受体的表达，减轻了凝血酶的神经毒性损伤，可能进一步明确了黄芩苷神经保护功能的作用靶点，为中医药治疗急性缺血性脑血管病提供新的实验研究