造血干细胞移植患者HCMV病毒UL97基因突变与耐药形成机制及其分子诊断技术研究

异体造血干细胞移植患者人巨细胞病毒（HCMV）移植后感染率近60%，是常见并发症。更昔洛韦(GCV)药物治疗有效，但发生耐药机率增多,导致临床难治。HCMV产生药物耐药与UL97基因突变密切相关，但产生突变以及耐药确切机制及过程仍不明确。本课题组进行UL97基因突变率约10%，通过基因克隆跟踪其动态变化提示准种现象存在的可能性。因此提出HCMV耐药机制假说：UL97基因存在耐药型突变准种，GCV治疗中被筛选成优势株，最终导致临床耐药难治。此外目前缺少适用于临床的HCMV耐药分子诊断技术。本课题主要研究：①研究HSCT患者GCV治疗前后UL97基因突变型及其准种的定量动态变化，证实HCMV耐药形成与突变型准种存在和筛选相关；②建立高分辨率熔解曲线技术（HRM)检测HCMV耐药表型，应用于临床以确定HCMV野生型与突变型准株比例，为临床提供实用有效的早期、快速检测HCMV耐药的诊断方法。

异体造血干细胞移植患者人巨细胞病毒（HCMV）移植后感染率近60%，是常见并发症。更昔洛韦(GCV)药物治疗有效，但发生耐药机率增多,导致临床难治。CMV 产生药物耐药与 UL97 基因突变密切相关，但产生突变以及耐药确切机制及过程仍不明确。本项目通过对骨髓移植患者CMV病毒感染的长期动态随访，建立和掌握CMV病毒及其UL97基因突变检测方法，明确骨髓移植人群中CMV病毒感染的危险因素、病毒负载量及其临床特征之间的关系。通过CMV阳性标本UL97基因突变筛查和动态监测，明确中国人群中CMV病毒UL97基因突变的发生率，突变株感染的临床特征，对可能具有耐药突变株的随访确认了CMV野生型和变异株的演变模式，提示符合病毒准种假说（quasispecies），即病毒群中存在各种基因变异株，突变变异株与野生型CMV比较属于劣势株，CMV耐药筛选遵循“选择-平衡”原理，即在病毒复制过程中选择出最适应于新环境（药物筛选压力）的变异株。在抗病毒药物选择压力下，较适应环境的变异株（倾向耐药株）被选择逐步形成优势株，最终发展成为耐药病毒感染。本项目取得的研究结果对理论上阐述骨髓移植人群CMV病毒耐药形成机制具有重要意义，同时为优化骨髓移植患者CMV病毒感染监测和耐药病毒株的筛选方法，指导临床诊断和治疗提供重要研究依据，具有一定实用价值。