木瓜属Chaenomeles种质资源的SRAP标记与评价

采用先进的分子标记评价花卉种质资源是当前园林植物研究领域的一大热点。本研究拟在广泛调查和收集木瓜属种质资源并进行经典分类的基础上，采用新型的SRAP分子标记技术对该属植物进行遗传多样性评价和亲缘关系研究。在SRAP-PCR扩增程序的优选基础上，对PCR反应体系中各重要参数进行优化组合，从而建立木瓜属植物的SRAP标准技术体系。利用建立的SRAP技术平台，首次构建出了我国木瓜属植物的SRAP指纹图谱，并对其进行遗传评价和亲缘关系研究，同时为木瓜属的经典植物学分类提供新的证据。本研究不但为木瓜属植物品种的科学评价提供新的手段，而且为育种亲本选择提供理论指导。

调查了我国木瓜属植物种质资源，完善了形态学标记；完成了木瓜属已知品种数据库建立；编制了木瓜属新品种DUS测试指南。筛选了12个标准品种和31个测试性状用于新品种DUS测试，提出了新品种的特异性、一致性、稳定性判别标准。采用灰色关联度法对27个木瓜属观赏品种的14个性状进行了综合评价。利用二次正交旋转组合设计优化SRAP-PCR反应体系。采用五因素二次正交旋转组合设计(1/2实施)，对PCR反应的5个因素(Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA) 进行研究，首次建立了PCR反应的各因素编码值与PCR结果评分值之间的数学模型；分析了SRAP-PCR反应体系中各因子的交互作用。该方法稳定可靠，可为其他物种PCR体系优化提供借鉴。. 从157对SRAP引物中筛选出能稳定扩增的引物32对，利用较优的17对引物对供试材料进行扩增，共检测到525个多态性位点，多态位点百分数为100%，平均每对引物扩增出30.9个多态性位点；有效等位位点数（Ne）在1.0471~1.2274间，平均值1.1289；Nei’s遗传多样性指数（H）在0.0428~0.1652之间，均值0.1007；Shannon信息指数（I）0.0986~0.2863之间，均值0.1911。98份材料间Nei遗传相似系数范围0~0.6596，平均0.2192，表明各材料间亲缘关系较远。采用UPGMA聚类法将98份材料分为9类，品种依据其分类学归属和杂交亲本来源首先聚类，花色、花型、瓣型及种源地次之。木瓜属植物类间变异在总的遗传变异中平均占23.2%，各类间的遗传距离均不大且基因流动性较高（Nm=1.6580）。. 筛选出了6对核心引物用于构建木瓜属指纹图谱，其中引物ME3-EM3与另外5对引物中任意一对两两组合均可以鉴别出所有品种。结合引物ME3-EM3和ME6-EM1扩增出的19条多态性条带，借鉴常规植物检索表编制方法，编制了98个品种的分子标记检索表。以SRAP标记为基础，构建98份木瓜属种质资源的核心种质。按照10%~80%的整体取样比例，依据分组法和不分组法分别取样，对比两方法的异同。另外，结合C语言编程，提出了适用于本属植物核心种质构建的方法：多态位点数最高法。