三七总皂苷通过Vps34自噬通路抑制间歇性缺氧诱导的血小板粘附的研究

Platelet adhesion to endothelium induced by chronic intermittent hypoxia (CIH) is crucial for thrombogenesis initiated by obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome (OSAHS), where Vps34-mediated autophagy pathway plays a critical role. We reported that Panax notoginseng Saponins (PNS) could inhibit platelet adhesion induced by endothelial cell (EC) injury. We therefore hypothesize that PNS inhibits platelet adhesion induced by CIH via Vps34 autophagy pathway. To test the hypothesis, we choose CIH rat model, CIH-injured EC-platelet co-culture model and platelet hypoxia model to observe the effect of PNS on platelet adhesion and thereafter to illuminate the underlying mechanisms of PNS based on Vps34-autophagy pathway using Vps34 inhibitor and its upstream regulator classⅠPI3K inhibitor. This will provide a new insight into OSAHS treatment with blood-activating herbs.

慢性间歇性缺氧（CIH）诱导的血小板－内皮粘附是阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）促进血栓形成的关键环节，Vps34介导的自噬通路在血栓形成过程中具有重要作用。本课题组前期研究证实，三七总皂苷（PNS）可减少内皮损伤诱导的血小板粘附。因此，本课题假说如下：PNS可抑制CIH诱导的血小板粘附，作用机理与调控Vps34自噬通路相关。围绕这一假说，本研究拟通过建立CIH大鼠模型、CIH损伤内皮－血小板共孵育模型、血小板缺氧模型，证实PNS抑制CIH诱导血小板粘附的疗效，在此基础上，分别采用Vps34及其上游蛋白Ⅰ型PI3K的特异性抑制剂，探索PNS调控Vps34自噬通路发挥上述作用的分子机制。这对应用活血中药防治OSAHS患者血栓事件具有重要的意义。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合症（OSA）患者血栓风险明显升高，但发生机制尚不十分清楚。我们在本研究中建立了慢性间歇性缺氧（CIH）诱导的大鼠模型及CIH大鼠内皮细胞-正常大鼠血小板共孵育模型，对不同诱导剂诱导的血小板聚集率、血小板表面粘附受体表达、血小板释放功能进行了检测，发现在上述两种模型中血小板反应性均明显升高；血小板自噬蛋白Vps34/Beclin1/Atg14、VAMPs及LC3II均升高；同时，我们还发现内皮细胞凋亡及vwF表达均增加，内皮细胞自噬通路调节蛋白Vps34表达也增高。上述发现表明CIH环境下血小板及内皮细胞存在自噬过度状态。我们通过引入Vps34抑制剂及PI3K抑制剂，证实Vps34可加强血小板VAMP/血小板释放及PI3K/Akt信号通路，从而介导CIH环境下血小板聚集率升高、血小板粘附性升高，阐明了OSA相关血栓并发症的发病机制。此外，我们证实三七总皂苷（PNS）可以通过抑制Vps34及PI3K/Akt信号通路减轻CIH诱导的血小板反应性增高，从活血化瘀角度为OSA患者血栓并发症防治提供新思路，为PNS用于OSA患者临床综合管理提供实验依据。