miR-30s通过介导Notch通路调控巨噬细胞极化参与狼疮性肾炎发病的分子机制研究

Lupus nephritis(LN) is the main complication of systemic lupus erythematosus, which may also leads high mortality. In recent studies, the imbalance of macrophage polarization is involved in the development of LN, which is closely related to the poor prognosis. However, the molecular mechanism of macrophage polarization in LN has not been well elucidated. Our previous studies demonstrated that miR-30s expression was down regulated in LN patients. The miR-30s can target to the key genes in the Notch signaling, which is involved in the macrophage polarization. We intend to confirm that miR-30s can regulate the macrophage polarization via the blockage of Notch signaling pathway in vivo and vitro. Therefore, we can clarify the molecular mechanism of renal injury in LN, which may provide the new sight in the target therapy for LN.

狼疮性肾炎(lupus nephritis, LN)是系统性红斑狼疮最主要的并发症，也是导致患者高死亡率的主要原因。越来越多的证据表明，巨噬细胞的极化失衡参与了LN的发生发展过程，并与LN患者的肾脏预后密切相关。目前LN患者肾组织内巨噬细胞极化的分子机制尚未得到很好的阐明。我们前期研究发现，LN患者肾脏内miR-30s的表达下调，并且miR-30s可靶向性的抑制Notch通路中的关键基因，而后者是巨噬细胞极化调控中的关键信号通路。在此基础上，本研究及拟从体外细胞、动物模型等层面证实miR-30s可通过抑制Notch信号通路，调控巨噬细胞的极化过程。本研究的开展有望进一步的明确LN患者的肾脏损伤分子机制，为LN的治疗提供新的干预靶点。

背景：多靶点治疗方案(糖皮质激素，吗替麦考酚酯和他克莫司)被证实可有效促进狼疮性肾炎(LN)达到缓解。为了探索多靶点治疗方案潜在的分子和细胞机制，我们对LN小鼠模型进行了全面的转录组学分析发现，与单药方案相比，多靶点治疗方案单独调控了一组基因的表达，其中Caspase-1下调明显。而Caspase-1可切割gasdemin D(GSDMD)，促进细胞焦亡的启动和进行。因此我们推测细胞焦亡可能参与狼疮肾炎的发病机制，并进一步研究多靶点治疗方案能否抑制Caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡的发生。.研究方法：采用免疫组化和免疫印迹法检测LN患者和MRL/lpr小鼠LN肾组织中GSDMD的表达和活化。将LN患者血清与肾脏固有细胞(HEK293T细胞)共培养，采用LPS+ATP诱导焦亡，验证多靶点治疗方案对GSDMD诱导的细胞焦亡的抑制作用。进一步在MRL/lpr小鼠模型和LN患者中评估联合治疗对caspase-1/GSDMD诱导的细胞贾汪的抑制作用。采用流式细胞术分析外周血Caspase-1/PI阳性细胞数与系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDAI）的相关性。.结果：LN患者和MRL/lpr小鼠肾组织中GSDMD表达均增高，GSDMD在MRL/lpr小鼠肾组织中被切割。外周血Caspase-1/PI阳性细胞数与狼疮疾病活动度正相关。Ac-FLTD-CMK，一种GSDMD衍生的抑制剂，可抑制MRL/lpr小鼠肾炎的发生。多靶点治疗方案通过抑制caspase-1/GSDMD介导的LN患者和MRL/lpr小鼠的细胞焦亡而发挥肾脏保护作用。.结论：多靶点治疗方案可抑制caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡，从而有效降低LN患者的疾病活动度，促进疾病缓解。