ACE基因多态性与BR受体异构在DKD疾病进展中的机制

The gene polymorphism of angiotensin converting enzyme (ACE) and bradykinin receptor (BR) influence the progression in diabetic kidney disease (DKD). The study demonstrated that the response to ACE inhibitor (ACEI) for DKD patients with ACE genotype II was better than that with the genotype DD in decreasing the urinary albumin excretion (UAE), 51.5% and 7.7%, respectively. In the previous study, we found that an ACE inhibitor, Perindopril treatment with kallidinogenase significantly reduced the UAE in DKD patients, and ameliorate the podocytes damage in DKD mice model. Unfortunately, the mechanisms of the synergistic effects between the two drugs, and especially the internal relations among the gene ACE polymorphism and BR receptor remains unclear. Therefore, we raised the hypothesis that the genotype ACE II and B2R can activate the downstream signaling pathways, then alleviate the disease progression and reach the synergistic effects. In order to test the hypothesis, we intend to establish the genotype ACE II, ID and DD DKD mouse model by transgenic technology, then discuss the pathogenesis of this genotype for DKD prognosis in molecular, cellular and animal model levels by electronic microscopy, immunohistochemistry, flow cytometry, laser-confocal microscopy, real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, electrophoretic mobility shift assay, western immunoblotting, and radioimmunoassay.

血管紧张素转换酶（ACE）与缓激肽受体（BR）基因影响糖尿病肾病（DKD）进程。已知ACE基因II比DD型对ACEI反应显著，DKD者蛋白尿分别下降51.5%和7.7%。我们前期研究表明，培哚普利（一种ACEI）联合胰激肽原酶可显著降低DKD者蛋白尿，改善模型鼠足细胞损伤。但这两种药物的协同机制，特别是ACE基因多态性与BR组合的内在联系却鲜见研究。故提出假说：ACE基因II型与B2R组合型，可激活BR受体下游信号，缓解病程，达到协同效应。为验证该假说，本研究通过转基因技术，建立ACE基因II、ID与DD型DKD模型，采用肾小球电镜、免疫组化，流式细胞术，激光共聚焦，实时定量PCR，电泳凝胶流动转移实验，Western免疫印迹，及放射免疫等方法，从分子、细胞和动物模型水平探讨ACE多态性与BR组合对DKD预后的机制，以及不同基因型对ACEI、胰激肽原酶干预的差异，为DKD治疗提供新的思路。

在本研究体内外实验结果已清晰地展示出ACE I/D和BDKRB2 + 9/- 9多态性在糖尿病肾病中的作用。相对于ACE II-B2R - 9bp基因型，ACE II-B2R + 9bp，ACE DD-B2R + 9bp或ACE DD-B2R - 9bp基因型均引起糖尿病相关的常见代谢指标的显著变化，其中包括24小时尿蛋白，Alb，Chol，TG，LDL，ALT，AST，Scr增加和HDL降低。在肾组织中，ACE II-B2R + 9bp，ACE DD-B2R + 9bp或ACE DD-B2R-9bp基因型加重了糖尿病肾病的病理变化，其中包括氧化损伤、炎症反应、肾小球损伤、胶原蛋白沉积和GBM增厚。此外，ACE II-B2R + 9bp，ACE DD-B2R + 9bp或ACE DD-B2R - 9bp基因型还增强了高糖诱导的一些改变，如炎症反应、线粒体功能障碍和体外细胞凋亡，它们可能是通过氧化应激介导的线粒体凋亡来增强的。特别是在本研究中，最显著的改变仅在ACE DD-B2R + 9bp基因型糖尿病小鼠或在高糖培养下的ACE DD-B2R + 9bp基因型小鼠的足细胞中可观察到，这表明了在糖尿病肾病进展中ACE DD或B2R + 9bp的遗传风险性。.除了证明在糖尿病肾病进展中ACE DD或B2R + 9bp基因型的遗传风险性外，也需寻求其潜在的机制。ACE II-B2R + 9bp，ACE DD-B2R + 9bp或ACEDD-B2R - 9bp基因型与ACE II-B2R-9bp基因型相比时，有一个促进因素可能分别不可思议地增加STZ糖尿病模型和高糖培养的正常足细胞的炎症分布。最近有报道说ACE I/D多态性与绝经后妇女的肾上腺活性和全身炎症反应有关系，这提示我们除了ACE II-B2R − 9bp基因型的STZ糖尿病小鼠和分离的足细胞外，之所以ACE II-B2R + 9bp、ACE DD-B2R + 9bp或 ACE DD-B2R − 9bp基因型的炎症标志物显著增加，至少部分原因可能是由于ACE I/D多态性介导的炎症反应。MU等人揭示了雷米普利对已行动脉旁路移植术的冠心病患者的抗炎性损伤的保护作用，但这种作用与ACE I/D多态性无关。或者不同基因型对应的炎症分布所致的改变是否显著可归因于BDKRB2+ 9/- 9多态性。