通过改变分子伴侣Hsp70活性提高抗朊病毒药物筛选模型灵敏度的研究

构建一种简单、安全、高效的抗朊病毒药物筛选模型是解决当前疯牛病、克雅氏病等朊病毒疾病防治的瓶颈与难点之一。本项目是基于目前酵母可取代动物细胞进行抗朊病毒药物筛选的理论研究基础，利用酵母朊病毒与动物朊病毒存在着严格种间屏障的优势，在课题组前期理论研究成果和已构建的抗朊病毒药物筛选模型（NSFC青年项目资助）基础上进行的深入应用指向研究。本课题组针对当前使用的酵母细胞对药物敏感性低的缺陷，对调控朊病毒的分子伴侣Hsp70家族采用基因突变或敲除来改造酵母细胞，从而增加该体系对药物的灵敏度并实现筛选促进朊病毒聚集的反效药物的能力，进一步结合前期研发的基于荧光蛋白的实时定量检测技术和基于SDD-AGE的定量检测手段，建立一个细胞水平高灵敏度、高内涵的创新型抗朊病毒药物筛选模型。本研究可解决目前抗朊病毒药物筛选效率低及安全性差的关键技术问题，并且为今后高通量抗朊病毒药物筛选平台的建立提供关键参数。

构建一种简单、安全、高效的抗朊病毒药物筛选模型是解决当前疯牛病、克雅氏病等朊病毒疾病防治的瓶颈与难点之一。本项目是基于目前酵母可取代动物细胞进行抗朊病毒药物筛选的理论研究基础，利用酵母朊病毒与动物朊病毒存在着严格种间屏障的优势，在课题组前期理论研究成果和已构建的抗朊病毒药物筛选模型基础上进行的深入应用指向研究。本课题组针对当前使用的酵母细胞对药物敏感性低的缺陷，对调控朊病毒的分子伴侣Hsp70 家族采用基因突变或敲除来改造酵母细胞，从而增加该体系对药物的灵敏度并实现筛选促进朊病毒聚集的反效药物的能力，进一步结合前期研发的基于荧光蛋白的实时定量检测技术和基于SDD-AGE 的定量检测手段，建立一个细胞水平高灵敏度、高内涵的创新型抗朊病毒药物筛选模型。其研究成果主要集中在五个方面：1）分子伴侣Hsp70点突变对酵母朊病毒形成的影响及其可能的分子机制；2）不同基因重组型酵母朊病毒[PSI+]菌株在抗朊病毒药物筛选中灵敏度的比较；3）朊病毒及其相关淀粉样蛋白的序列结构对于错误折叠-淀粉样聚集特性的影响；4）抗朊病毒候选药物的小规模筛选；5）促进酵母朊病毒自发形成化合物的筛选及其可能作用机制的分析。上述研究成果已申请5项国家职务发明专利，出版了1部专著，有12篇学术论文在SCI/EI 收录的国际刊物正式发表，22篇学术论文在国内学术期刊上正式发表。另外5篇学术论文和3项专利正在投稿，将于近期陆续发表。本研究可解决目前抗朊病毒药物筛选效率低及安全性差的关键技术问题，并且为今后高通量抗朊病毒药物筛选平台的建立提供关键参数。