控温毛细管电泳-化学发光检测接口的研制及其在生物样品分析中的应用研究

The study on the temperature control interface for coupling capillary electrophoresis (CE) with chemiluminescence (CL) detection and its application in the biosample analysis will be developed in this project. The main research content include: (1) The temperature control interface for coupling CE with CL detection will be designed. The CE-CL detection system will also be self-assembled. The problems of the decreases of the separation efficiency, sensitivity and stability that are caused by the addition of CL reagent will be solved. The reproducibility of CL detection will be improved by controlling the separation and detection temperature. The CL detection sensitivity will also be improved by raising the CL reaction temperature. This self-assembled CE-CL instrument will have the high separation efficiency of CE and high sensitivity of CL. (2) The new methods of CE with CL detection will be established for the determination of alkaloids, amino acids and carbohydrates. (3) The on-line preconcentration CE-CL methods for the determination of alkaloids, amino acids and carbohydrates will be developed by selecting the suitable sample pretreatment methods. The developed CE-CL method will be used to determine the above substances in biosamples. The study will provide the highly sensitive and highly stable CE-CL method for the analysis of biological samples. As the research results, we will publish around 7 papers in important journals and apply for a patent.

本项目拟开展控温毛细管电泳-化学发光检测接口的研制及其在生物样品分析中的应用研究, 主要研究内容包括：（1）开发能控制温度的毛细管电泳（CE）和化学发光（CL）联用的接口,并自组装CE-CL仪器。该仪器能较好解决由于CL试剂的引入而造成分离效率、灵敏度和稳定性降低等问题，能通过控制分离和检测的温度来提高CL检测的重现性，同时也可通过提高CL反应温度来提高CL检测的灵敏度，具有CE的高分离效率和CL检测的高灵敏度。（2）建立生物碱、氨基酸和糖类测定的CE-CL新方法。（3）结合CE在线富集技术,选择合适的样品前处理方法，将所建立的CE-CL检测方法应用于生物样品中上述物质的测定，为生物样品分析提供高灵敏和高稳定性的CE-CL新方法。研究成果可望在国内外重要刊物上发表论文7篇左右，同时申请一个专利。

目前，研究者已开发出各种不同的毛细管电泳-化学发光（CE-CL）联用接口，但这些接口装置仍处于实验室自行加工阶段，有各自的优缺点，基本没有控温装置对分离毛细管和CL反应进行温度控制，造成CL检测的重现性较差，也无法通过提高CL反应温度来提高检测的灵敏度。同时自组装的CE-CL仪器的自动化程度不高, 用于提高毛细管电泳灵敏度的在线富集技术在CE-CL中较难实现。本项目主要研究内容包括（1）研制了三种易于操作且可控制温度的CE-CL联用接口, 其中通过电脑调控温度的CE-CL接口已并入商品化BPCL微弱发光测量仪。自组装的CE-CL仪器较好地解决了由于CL试剂的引入而造成分离效率、灵敏度和稳定性降低等问题，同时通过控制检测的温度提高了CL检测的重现性和灵敏度,具有CE的高分离效率和CL检测的高灵敏度，有望实现CE-CL检测仪器的商品化。（2）分别建立了灵敏稳定的生物碱、黄酮类化合物和酚酸类化合物的毛细管电泳-化学发光测定方法，并成功用于实际样品（黄连、槐米、金银花和川芎）的分析，为复杂样品分析提供了一种高灵敏和高稳定的CE-CL新方法，具有较重要的实际应用价值。