基于特征肽段智能识别的鹿茸及相关产品真伪鉴别系统研究

Cervi Cornu Pantotrichumare, which were a famous and precious Traditional Chinese Medicines (TCM), were widely used for a long history in China. Adulteration and counterfeit of Cervi Cornu Pantotrichumare occured frequently, because that the demand of Cervi Cornu Pantotrichumare and products contained Cervi Cornu Pantotrichumare exceeded supply, but the sources were limited. We couldn't control the quality of Cervi Cornu Pantotrichumare because of no specific method for idenfification of Cervi Cornu Pantotrichumare currently. Because the sequence of protein of different deers are different, In our study, we will analyze the trypsin digested samples by UPLC-Q/TOF/MS, The UPLC-MS data will be subjected to principal component analysis and an orthogonal partial least squares data analysis (OPLS-DA) to find marker peptide of Cervi Cornu Pantotrichumare. We will give the amino acid sequence of marker peptides base on the mass spectrometry of marker peptides, and synthesize the marker peptides. Method of qualitative, quantitative analysis of marker peptides and intelligent identification based on the libaray of marker peptides in Cervi Cornu Pantotrichumare. Our study will be the scientific base to quality control and evaluation of Cervi Cornu Pantotrichumare.

鹿茸为常用的传统名贵中药，在我国有悠久的使用历史，临床使用广泛。市场上以鹿茸为原料的相关产品多，用量很大。近年来，随着市场需求的日益增涨，加之资源有限，市场上鹿茸及相关产品假冒伪劣现象非常严重；同时，由于专属性分析方法的缺乏和质量控制标准不够完善，导致产品质量难以有效的控制和评价，给市场监管带来很大的挑战。本项研究基于不同品种来源的鹿茸所含蛋白的氨基酸序列必然存在差异这一原理，拟采用蛋白质酶切、LC-MS肽段检测及数学统计等方法，找出不同品种鹿茸的特征肽段；围绕特征肽段的序列和结构特点、色谱质谱信息，建立可用于定性鉴别的特征图谱和可用于定量测定的LC-MS/MS方法和ELISA方法，并形成鹿茸特征肽智能识别信息库。为该类药材及相关制剂的质量控制和评价提供科学依据。

摘 要.本课题研究内容主要包括：.一 建立鹿茸药材酶解多肽的特征图谱。分别在选择离子模式以及子离子模式下对4个酶解多肽候选离子进行传输电压与碰撞能量的优化，从而分别选出两个子离子，构建了八组离子对，在多反应监测模式下，从而建立了鹿茸药材酶解多肽的特征图谱。.二 建立正品鹿茸混入伪品（驯鹿茸）的真伪鉴别方法。使用胰蛋白酶对三种鹿茸药材水提液进行酶解；利用UPLC-QTOF/MS技术建立鹿茸药材的酶解肽图；然后，结合Progenesis QI软件釆用主成分分析法(PCA),将鹿茸进行种属区分，进一步釆用偏最小二乘法(OPLS-DA)进行因子分析，找出具有鉴别意义的两个驯鹿茸特征肽; 然后，在子离子模式下优化条件，分别寻找响应较高的两个子离子，组成四组特征离子对，运用多反应监测模式(MRM)对基原准确的样品和未知样品进行验证；最后，根据特征肽的二级质谱(MS/MS)碎片信息，运用Masslynx Biolynx软件，解析出两个驯鹿茸特征肽的序列，并进行化学合成, 验证特征序列的正确性。.三 不同规格鹿茸饮片的多指标质量等级评价研究。首先结合不同规格鹿茸饮片中氨基酸含量随生长时期，而呈现较为规律的变化的现状，建立了异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生化-高效液相色谱法，分别对鹿茸蜡片、粉片、血片、骨片50批鹿茸饮片中15种氨基酸含量进行同时测定，并进行了方法学的验证，以氨基酸含量为分析指标，对鹿茸饮片的质量进行评价。其次，利用Chem Pattern软件建立不同规格鹿茸饮片的指纹图谱并进行化学计量学分析。包括相似度分析、聚类分析及主成分分析，为不同规格鹿茸饮片的质量等级评价提供了一定参考。