贾第虫抗原变异中的染色质重塑作用研究

蓝氏贾第鞭毛虫病是全世界危害人类健康的十种主要寄生虫病之一。特别是贾第虫所致艾滋病患者致死性腹泻已引起医学界的重视。作为早期分化的单细胞真核生物，贾第虫的调节系统，特别是表面抗原变异的调节，与其他真核生物有很大的区别。目前的研究结果表明，染色质重塑可能在表面抗原变异中发挥重要作用。本项目基于前期工作中已克隆得到的中国人源蓝氏贾第鞭毛虫C2株表面变异抗原基因，拟建立表达其他不同VSP抗原的亚克隆，为VSP抗原变异的研究提供良好的技术平台；同时拟对这些克隆中抗原变异与染色质结构变化的关系进行较为系统的分析，为进一步探讨其基因转录调控及变异机制奠定基础。结果将为从分子水平揭示贾第虫在宿主体内的免疫逃避机制；对研究贾第虫基因表达调控方式以及艾滋病致死性腹泻药物治疗的研究均有重要意义。

为研究表观遗传学机制在贾第虫中的作用，特别是在表面抗原变异中的作用及其机制.,本研究克隆了贾第虫H2A、H2B、H3的基因，并构建了原核表达载体，进行重组表达。纯化后蛋白免疫新西兰白兔制备了抗血清，其中H2A和H2B抗血清还进一步进行了抗原亲和纯化。抗血清及纯化后的抗体能够识别重组抗原，但不能识别虫体分离抗原，其原因尚待进一步研究。本研究还克隆表达了表观遗传学中的重要基因GlSir2和GlGCN5，并进行了重组表达。重组Glsir2具有去乙酰化酶活性，且能够被尼克酰胺NAM抑制。同时还发现NAM能够抑制贾第虫的生长。这些结果表明表观遗传学机制在贾第虫生活过程中发挥重要作用。