冠脉介入术后患者抗血小板治疗抵抗中microRNA/VAMP8通路差异的机制研究

冠心病PCI术后再发缺血性心血管事件与抗血小板治疗反应低下有关，我们前期工作发现血小板活化还涉及免疫炎症特性激活。已知VAMP8在血小板活化过程中起关键性作用，大量研究显示，miR-34a、miR-146a、miR-96参与了血小板产生或激活过程，但其对血小板VAMP8调控作用、对血小板免疫炎症特性影响不清楚。我们通过检测再发缺血性心血管事件PCI术后患者巨核细胞和血小板内MiRNAs及VAMP8水平，研究事件发生与患者miRNA水平的相关性；通过体外诱导K562细胞分化巨核细胞，升高或降低MiRNA-96、MiRNA-34a和MiRNA-146a水平，研究其对巨核细胞分化成血小板后VAMP8及血小板激活的调控机制；体外培养血小板，研究miRNA-96对血小板激活及VAMP8调控作用，以及双重抗血小板药物干预对其影响，为临床进一步强化抗血小板治疗探索新靶点。

背景：血小板高反应（high on-treatment platelet reactivity，HPR）诱发急性冠脉综合征患者反复发生各种缺血性心脑血管事件。在血小板形成过程中，巨核细胞中miRNAs与其他细胞器、颗粒、mRNA等一起转移到血小板中。因此， microRNA从血小板的前体细胞——巨核细胞，就开始参与调控血小板形成及以后的活化及功能。研究表明miR-34a 和miR-146a诱导巨核细胞增生分化及维持过程中发挥重要作用。另外，VAMP8（vesicle-associated membrane proteins 8）在血小板活化中发挥重要作用，而miR-96在血小板内含量丰富。因此，本项目从巨核细胞层次，探讨miR-34a、miR-146a和miR-96对巨核细胞分化及血小板免疫活化的调控机制。研究内容：1、冠心病血浆中miR-34a、miR-146a和miR-96水平，及与血小板活性的相关性；2、研究巨核细胞中miR-34a、miR-146a和miR-96对巨核细胞分化及血小板免疫活化的调控作用及机制；重要结果：1、冠心病患者血浆中miR-34a、miR-146a高水平表达，血小板活性增强，而miR-96表达水平较对照组降低。2、miR-34a和miR-146a升高巨核细胞内免疫炎症蛋白表达及血小板活化分子表达。3、miR-96能直接作用于靶基因VAMP表达，进一步介导血小板活化。而阿司匹林干预后，减弱了miR-96介导的血小板免活化水平。关键数据：在巨核细胞miR-34a、miR-146a与血小板免疫活化水平呈正相关，而miR-96与血小板免疫活化水平呈负相关。升高/降低miR-34a、miR-146a分别抑制/升高miR-96表达水平，因此，在巨核细胞到血小板生成过程中，可能存在某个分子“x”，将三者连成“miR-34a/miR-146a-x- miR-96”调控网络，从巨核细胞细胞开始，便调控血小板免疫活化功能。科学意义：本研究从血小板前提——巨核细胞及“microRNA网络”角度，探索血小板免疫活化的调控机制，为进一步解释血小板高反应性，临床冠心病患者抗血小板治疗提供新的实验证据或靶标。