红葡萄酒花色苷在Caco-2细胞模型中的关键吸收机制研究

Anthocyanins of red wine have a wide range of physiological functions, such as antioxidant activity, anti-cardiovascular disease and antitumor effect. Studying the key absorption mechanism of anthocyanins is of great significance to explain the physiological activity of anthocyanins. In this study, gut microflora is co-cultured with mono-anthocyanins under anaerobic conditions, the absorption mechanism of anthocyanins and their products in Caco-2 cell model are studied by using the HPLC-MS/MS and GC-MS, coupled with the method of transporters inhibition by using the inhibiters or substrates. The absorption kinetics of anthocyanins, their main absorption form and key absorption mechanism are amplified in order to provide the theoretical basis for anthocyanins metabolism, physiological activities, anthocyanins availability and drinking wine.

红葡萄酒花色苷具有抗氧化、心血管保护和抗肿瘤等广泛的生理活性功能。研究花色苷的关键吸收机制对阐明花色苷的生理活性功能有非常重要的意义。本课题以葡萄酒花色苷单体为研究对象，将花色苷和肠道微生物厌氧共培养，利用HPLC-MS/MS和GC-MS技术研究花色苷及其产物在Caco-2细胞模型中的吸收转运，并通过抑制剂或底物抑制相关转运蛋白的方法，阐明花色苷及其产物的吸收动力学特征，揭示花色苷的主要吸收形式及其关键吸收机制，为花色苷的体内代谢、生理活性功能、利用率的提高和葡萄酒的健康饮用提供理论基础与指导。

红葡萄酒含有丰富的花色苷，研究表明花色苷具有心血管保护、神经保护、抗肿瘤等生理活性功能，但是花色苷的关键吸收机制尚不明确。本课题以葡萄酒花色苷作为研究对象，采用模拟肠道pH和温度条件、肠道微生物厌氧共培养、Caco-2细胞模型吸收方法研究花色苷的关键吸收机制，为花色苷的体内代谢、生理活性功能、利用率的提高和葡萄酒的健康饮用提供理论基础与指导，有非常重要的理论意义和潜在的应用价值。.试验结果表明，花色苷在模拟肠道pH和温度下，可自发发生降解。花色苷在胃部相对稳定，其降解主要发生在肠道。花色苷在模拟胃肠环境中的稳定性与结构密切相关。肠道微生物对葡萄酒花色苷的降解有促进作用。二甲花翠素3-O-葡萄糖苷在肠道微生物作用下产生原儿茶酸和9种未知降解产物，而原儿茶酸又进一步降解并产生4种未知降解产物。.采用测定细胞跨膜电阻、细胞形态学特征、碱性磷酸酶活性、苯酚红和普萘洛尔通透性试验等多种方法共同表征了Caco-2单层细胞生长情况，建立了Caco-2细胞模型。在转运试验中，二甲花翠素3-O-葡萄糖苷在细胞模型中的转运量随时间增加其累计转运量逐渐增加，花色苷A→B侧的Papp大于B→A侧的Papp，且随浓度增加，A→B侧的Papp逐渐降低，表明花色苷的吸收与浓度和载体有关，花色苷存在通过蛋白运输载体进行主动吸收和主动外排。在转运抑制试验中，根皮苷显著抑制二甲花翠素3-O-葡萄糖苷的转运，且具有浓度依赖性，而根皮素的抑制作用较小。花色苷的主动吸收与转运载体SGLT1和GLUT2有关，且前者的作用可能大于后者。花色苷主要降解产物丁香酸随浓度和时间的增加其转运量增加，表明其吸收可能是被动吸收。.本课题建立了酚类物质液-液微萃取方法、建立了肠道微生物培养模型和Caco-2细胞培养模型，为花色苷及其它生理活性物质消化吸收机制的研究提供了方法学的有力支持。同时，试验研究结果也为进一步研究花色苷的降解吸收机制及相互作用等研究提供了良好的经验和理论基础。