APL肿瘤细胞血管生成拟态三维培养观察

Different from classical theory of angiogenesis, the opinion of vasculogenic mimicry (VM) might be responsible for not only compensating for shortcoming of the classical theory, but solving some argument of therapy of anti- angiogenesis. Along with the discovery of tumor stem cells in VM ,it might be more significant to make research of VM which is not limit to vassals of cancer. We will investigate VM of cells in acute promyelocyte leukemia (APL)with bone marrow mononuclear cells（BMMNC）by Three-dimensional cellculture; and compare microvascular density (MVD) and VM by upside Micro-telescope ；and cells which formed vasculogenic mimicry will be isolated by the laser capture microdissection, and explored if these cells have chracter of tumor stem cells，and fusion gene of PML/RARα by semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction subsequently. we wish make fundamental prepare for next study.

与经典肿瘤血管生成理论不同，血管生成拟态（（vasculogenic mimicry ，VM））理论不仅是对传统肿瘤血管生成理论的补充， 同时解决了目前抗血管生成治疗效果有限的理论疑点，随着研究发现肿瘤干细胞参与其中，VM已远远超出肿瘤血管范畴，故很有必要对其进行综合探讨。本课题从临床出发，以ＶＭ为纽带，试图建立三维立体培养APＬ的骨髓单个核细胞、CD33+PML/RARα+MPO+ 细胞、CD133 + Flk1 + CD45-细胞的体系；倒置显微镜观察VM以及ＭＶＤ形态；结合激光捕获显微切割技术分离形成VM的白血病细胞，检测形成VM的细胞是否具有肿瘤干细胞特性；对参与经典血管以及VM细胞的PML/RARα+融合基因进行比较，全面阐述APL中细胞形成VM的差异，为进一步寻找治疗靶点打下坚实基础。

血管生成拟态（vasculogenic mimicry ，VM）是指一种由肿瘤细胞形成、模拟血管壁结构的、可输送血液的管道系统；是一种不依赖机体内皮细胞衬覆的肿瘤血供模式。本研究主要探讨急性早幼粒白血病(APL)中是否存在VM。本研究首先通过免疫组织化学法观察骨髓连续切片中微血管密度（MVD）、幼稚前体细胞簇（ALIP）等结构与VM的关联性；接着通过分选APL骨髓中的单个核细胞，建立三维立体培养APL肿瘤细胞（CD33+PML/RARα+MPO+）、APL相关内皮祖细胞（EPC/CD133+Flk1+CD45-）的培养体系，对APL中可能形成VM的细胞进行特殊培养，观察是否具有形成VM样结构的细胞；最后通过APL细胞和内皮细胞（EC）细胞共培养深入探讨APL细胞对EC的影响机制。本课题发现：1.在APL骨髓组织中，与经典内皮血管通路相关的的微血管密度（MVD）明显增加；在APL缓解标本ALIP结构中未发现PAS染色阳性的微血管结构。2.细胞三维培养发现EPC、EC可以形成管腔样结构；而CD34+/CD38-和CD34+/CD38+白血病干细胞、CD133+和CD133-的白血病细胞、CD33+PML/RARα+的APL细胞均不具备形成VM样结构的能力。3.通过APL细胞和EC细胞共培养发现EC细胞的增殖能力产生明显抑制；通过芯片筛选及RNA干扰试验，首次发现相关抑制基因包括DIDO1、ZC3H18、SMURF2等；进而深入探讨了DIDO1对EC细胞细胞功能（mRNA水平的表达量、增殖速率、血管形成、凋亡）变化，证实干扰目的基因DIDO1对EC具有抑制其增殖的作用。本研究结果提示：1.APL骨髓组织中存在VM样结构可能性很小和未找到能形成VM样结构的肿瘤细胞。2.VM本质可能是肿瘤细胞内皮可塑性转化，通过APL细胞和EC细胞共培养对探讨两者间关系提供了一个方向。