大黄对幼龄大鼠胆汁淤积过程中FXR通路的作用机制研究

Infantile cholestatic diseases seriously affect the health of the baby. However, the clinical effective drugs of cholestasis is not much and limited efficacy. Our previous study found that emodin can inhibit inflammatory mediators, antioxidation, improving liver circulation, reduce the damage signal, control the infiltration of neutrophils to relieve the cholestatic hepatic injury of bile. The recent discovery of nuclear factor FXR plays a pivotal role in cholestasis.This research aims to explore the intervention mechanism of rhubarb on nuclear factor FXR from two aspects of cell and animal. In the cell model, using shRNA technology and FXR inhibitor down-regulated FXR expression, the use of emodin intervention cell at the same time, to change detection of FXR and downstream molecules, contrast with ursodeoxycholic acid, dexamethasone ,explicit the role of emodin on FXR in the regular expression and no expression respectively ,further understand the function of rhubarb and emodin on conventional FXR molecule expression and no expression in animal experiments, clear the mechanism of action of emodin treatment of cholestasis, make a meaningful exploration to find new clinical treatment of infantile cholestasis method.

婴儿胆汁淤积性疾病严重影响婴儿健康。然而，目前临床针对胆汁淤积的有效药物不多且疗效有限。我们前期实验发现大黄能通过抑制炎性介质，抗氧化，改善肝脏循环，减少损伤信号，控制中性粒细胞浸润来达到缓解胆汁淤积性肝损伤的作用。近期发现核因子FXR在胆汁淤积中起枢纽作用。本课题拟从细胞和动物两个层面来探讨大黄对核因子FXR的干预机制。在细胞模型下，分别采用短发夹RNA干扰技术和FXR抑制剂下调FXR表达，使用大黄素干预细胞，检测FXR及下游分子的变化，并与熊去氧胆酸、地塞米松对比，明确FXR在常规表达，不表达情况下大黄素分别所起的作用；并进一步在动物实验中明确大黄及大黄素对FXR分子常规表达，不表达的情况下所起的作用，明确大黄治疗胆汁淤积的作用机制，为找到临床治疗婴儿胆汁淤积的新方法做出有意义的探索。

项目的背景：婴儿胆汁淤积的发病率为出生婴儿1/2500。目前治疗的可选药物有限，熊去氧胆酸(UDCA)成为大家公认的治疗婴儿肝内胆汁淤积的有效药物，能够缓解一些胆汁淤积患者的临床症状，但是约有三分之一的胆汁淤积患者对UDCA无效，这部分患者将面临着胆汁淤积肝纤维化、肝硬化、肝功能衰竭需要肝移植的严重后果。激素类药物由于其副作用限制其在临床的长期使用。研制出适用于婴幼儿的胆汁淤积的药物显得尤为迫切。课题组前期的实验研究发现大黄的单体大黄素能抑制炎性介质、抗氧化、改善肝脏循环，减少损伤信号，控制中性粒细胞浸润来达到缓解胆汁淤积损伤作用，新近发现法尼醇X受体(FXR)在胆汁淤积中起枢纽作用。主要研究内容：本课题以“FXR为研究的靶点”，从动物和细胞层面研究大黄及其单体大黄素对FXR的干预机制。从细胞层面，采用人胚胎肝细胞L02分子正常表达、低表达（FXR抑制剂孕二烯二酮（Guggulsterones）抑制或siRNA干扰）及过表达（FXR激动剂GW4064或慢病毒上调干预）情况下，检测FXR及下游相关分子的基因表达，并且与熊去氧胆酸或者地塞米松对照比较。从动物层面，首先建立幼龄大鼠肝内胆汁淤积模型，采用大黄及大黄素分别干预，检测肝功能等生化指标、观察其病理改变、检测FXR及下游相关分子的基因表达。重要结果及关键数据：研究结果明1、人胚胎肝细胞L02细胞上均存在FXR及下游的相关分子的表达。2、大黄素对人胚胎肝细胞L02细胞在正常表达、低表达及过表达情况下均对FXR及下游相关分子有促进作用。3、α- 异硫氰酸萘酯(ANIT)成功建立幼龄大鼠胆汁淤积动物模型。4、造模后48h胆汁淤积的模型最重，最具有代表性。5大黄及大黄素均从生化和病理上缓解ANIT诱导的肝内胆汁淤积，且优于熊去氧胆酸及地塞米松，存在剂量相关。6大黄及其大黄素均有上调幼龄大鼠肝脏FXR受体及下游分子基因的表达。科学意义：本研究揭示了大黄及大黄素治疗治疗胆汁淤积的FXR通路的作用机制，为找到临床治疗婴儿胆汁淤积的新方法做出有意义的探索，促进其临床应用。