补肾醒脑法改善2型糖尿病记忆障碍小鼠胰岛素信号调控机制研究

本课题提出以脑为轴心的"胰（脾）－脑－肾轴"消渴呆病病机学说，拟从影响胰岛素信号传导通路的机制出发，选择2型糖尿病记忆功能障碍小鼠为模型，通过水迷宫、尼氏染色及电镜等检测小鼠行为学、记忆功能及海马、大脑皮质形态学变化；采用放免法、免疫组化、RT-PCR、32P放射性标记法及蛋白印迹技术检测磷脂酰肌醇3 激酶蛋白及mRNA表达、糖原合酶激酶－3β的活性、Tau蛋白过度磷酸化水平的表达及大脑皮质与海马胰岛素受体数目，对比不同组别间的变化，探讨补肾醒脑法与"胰（脾）－脑－肾轴"的相关性；揭示胰岛素信号传导通路在2型糖尿病性记忆功能障碍发生发展中的机制；完善以脑为轴心的"胰（脾）－脑－肾轴"病机学说，建立2型糖尿病性记忆功能障碍中医药防治的动物实验方法；阐明该法的可能机制是对"胰岛素信号传导通路"的调控作用，从而填补2型糖尿病性记忆功能障碍中医药防治基础研究的空白，为临床治疗该病提供实验依据。

本课题基本在计划时间内顺利完成，并取得预期结果。成果：课题组以自发性2型糖尿病转基因KKay小鼠为试验模型，通过Morris水迷宫实验、免组化方法、蛋白印迹法（Western blotting）、RT-PCR、酶联接免疫吸附剂测定（Elisa）等技术，研究了醒脑益智方及其有效成分人参皂苷Rb1、葛根素对2型糖尿病小鼠记忆功能及胰岛素信号传导通路的影响及作用机制。结果显示，与正常组相比，模型组平台潜伏期明显升高（P＜0.05），PI-3K活性明显偏低（P＜0.05），GSK-3β和p-Tau水平均明显偏高（P＜0.05）；与模型组相比，罗格列酮组与之各项指标差异均不明显，各给药各组平台潜伏期均明显降低（P＜0.05），PI-3K活性均明显升高（P＜0.05），GSK-3β和p-Tau水平均明显降低（P＜0.05），其中以醒脑益智剂中剂量组效果最为显著；给药后各组间胰岛素受体水平差异无统计学意义。结论：在常规降糖的基础上，补肾醒脑法对2型糖尿病痴呆小鼠记忆水平有明显改善作用,其可能的作用机制为激活PI-3K蛋白、抑制GSK-3β表达、减轻Tau蛋白过度磷酸化,进而改善大脑海马胰岛素信号传导通路，阻止、延缓其相关神经病理进程。