新疆绵羊李氏杆菌病病原生态分布与多样性研究

单核细胞增多性李氏杆菌（Listeria monocytogenes，LM）是一种重要的食源性人畜共患病原菌，近年来，在食品安全、人类健康和动物生产等方面的重要性不断上升。本项目拟在前期研究基础上，对新疆石河子、奎屯、精河等五个绵羊李氏杆菌病发病地区的绵羊、饲草、土壤、水源以及野生鸟类等进行LM的分离鉴定；通过血清分型和小鼠毒力试验确定LM分离株的血清型和致病性；采用PCR-RFLP对分离株LM的主要毒力基因ActA和inlB片段进行谱型分析，并分析分离株LM的actA和inlB基因序列，比较不同来源LM的分子进化关系，从而揭示在绵羊李氏杆菌病发病区生态环境中LM的分布特点，不同来源分离株在血清型、致病性、分子亚型之间的多样性和相互关系。本项目的完成将丰富LM的生态学和在食物链上传播维持规律的认识，为有效控制动物李氏杆菌病的传播和制定科学的食品安全措施提供理论依据。

单核细胞增多性李氏杆菌（Listeria monocytogenes, LM）是一种重要的人畜共患病原菌，因其高致病性和死亡率被视为毒力最强的食源性病原菌，在食品安全、人类健康和动物生产方面占有重要的地位，但有关LM生态分布及传播机制的研究较少。本研究从病原生态学及分子流行病学方向，研究确定新疆绵羊李氏杆菌病发病区LM生态分布特点、不同来源LM分离株的生物学特性及相关性，探讨其生物多样性，为有效控制人及动物李氏杆菌病的传播及食品安全提供理论依据。研究结果与结论如下：.⑴ 绵羊是LM的主要携带者和保菌宿主。从新疆北疆五个地区8个规模化羊场健康绵羊及相关环境采集的863份样品中分离获得5株LM和24株塞氏李氏杆菌(L.seeligeri)，表明分离菌存在多样性。5株LM均来源于绵羊鼻腔和肛拭，而青贮、饮水、土壤及鸟粪均未检出LM，表明在羊场环境中LM主要存在于绵羊体内，绵羊是LM的主要保菌宿主，揭示带菌绵羊可从鼻液及粪便排菌并污染饲草与环境。.⑵ 两种不同来源分离株LM的致病性、毒力基因、血清型、谱系存在相关性。研究结果表明，两株致羔羊脑炎临床分离株LM和5株健康绵羊分离株LM均能致死小白鼠；均携带hly. act和inlB三种毒力基因；血清型均为1/2a；同属于谱系II（GP2）；7株LM的act和inlB基因核苷酸序列同源性超过93%。揭示在同一地区中临床致病株LM与健康绵羊分离株LM在某些生物学特性方面具有一致性，在遗传进化上存在相关性，此结果为绵羊李氏杆菌病的感染与传播是以内源性感染为主提供了有力佐证。.⑶ 两种不同来源LM分离株的inlA基因存在多态性。采用PCR-RFLP对8株LM分离株的基因型分型结果表明，5株健康绵羊分离株（血清型为1/2a）为E型，3株临床致病株中的2株（血清型为1/2a）为C型，另1株（血清型为4b）为B型。表明不同来源LM分离株在毒力基因inlA上存在多态性。进一步证明inlA基因可作为不同来源LM基因分型的标志性基因。