miR-132及相关信号通路在癫癎苔藓纤维出芽中的作用及分子机制

苔藓纤维出芽（MFS）是癫癎最主要的病理改变，但其发生的分子机制尚不清楚。大量文献及申请人的前期工作揭示，MFS的发生与多条信号通路构成的复杂网络有关，找到复杂信号网络的核心调控分子将有助于揭示MFS的发生机制。近期研究显示CREB活性依赖性MicroRNA-132（miR-132）及其靶基因p250GAP与树突生长、突触形成及可塑性有关，CREB/miR-132/p250GAP通路是否介导癫癎发作后MFS尚无文献报道。本项目拟通过抑制剂干预CREB、miR-132、p250GAP，结合形态学、分子生物学、电生理学等技术、在癫癎患者脑组织标本、动物模型及细胞模型中探讨该通路与MFS及癫癎的关系，进而从分子角度揭示癫癎的发病机制。本研究成果有望为癫癎的临床治疗提供新的方案和药物作用靶点。

本课题就CREB/miR-132/p250GAP通路是否介导癫癎形成及其具体机制进行研究，主要研究内容包括以下几个方面：1.检测人脑组织、动物癫癎模型及细胞癫癎模型中CREB/miR-132/ p250GAP表达情况变化；2.在小鼠癫癎模型中通过miR-132抑制剂ant-132干预其并表达观察慢性期癫癎发生率及发作程度，检测干预后鼠脑组织miR-132/p250GAP表达情况、golgi染色及NPY染色检测棘突变化及MFS程度；3.原代培养海马神经元无镁癫癎模型中通过分别干预miR-132及p250GAP后膜片钳检测神经元兴奋性及放电情况测定miR-132是否通过调控p250GAP表达影响神经元电兴奋性，通过分析上述干预后p250GAP下游RhoGTP酶活性确定miR-132是否通过RhoGTP酶活性影响细胞骨架的重塑从而导致突触重塑及兴奋性环路形成。通过上述研究我们发现：1.CREB、P-CREB、miR-132在癫癎人脑及鼠明显升高，p250GAP明显降低。2.ant-132干预后小鼠脑组织miR-132表达升高，p250GAP表达降低；行为学分析ant-132干预组慢性期自发发作显著减少；bax、bcl-2表达显著降低，提示凋亡减少；Golgi染色分析，干预组CA3、CA1椎体神经元细胞轴突树突得到广泛抑制，树突棘密度降低但蘑菇形树突棘比例升高，提示ant-132处理抑制突触重塑。3.C57小鼠原代海马神经元无镁癫癎模型miR-132干预后p250GAP表达升高，RhoGTP酶家族Cdc42活性降低，膜片钳动作电位提示兴奋性降低；miR-132和p250GAP同时干预后，Cdc42活性升高，神经元电兴奋性升高。.结论：MiiR-132通过干预p250GAP表达影响RhoGTP酶活性调节细胞骨架重塑对癫癎形成产生影响。.成果：已有8篇SCI发表，其他数据已整理成文投递SCI杂志，有望在2016年发表。.意义：本项目通过干预miR-132、p250GAP表达，结合形态学、分子生物学、电生理学等技术、在癫癎患者脑组织标本、动物模型及细胞模型中探讨该通路与突触重塑与癫癎的关系，进而从分子角度揭示癫癎的发病机制。本研究成果有望为癫癎的临床治疗提供新的方案和药物靶点。